甘蔗宿根矮化病病原菌膜蛋白lxx18460基因的特性研究

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3、论文甘薦宿根矮化病病原菌膜蛋白斗６０基因的特性研究邵敏学科专业植物学指导教师杨丽涛教授论文答辩日期２０１５．５．２３学位授予日期２０１５．６．２６答辩委员会主席李杨瑞教授广西大学学位论文原巧性和使用援枚声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已将别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了

4、明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权目归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，Ｐ：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播、，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。口不保密。＂＂（请在上相应方框内打Ｖ）论文作者签名｛文＾；曰期；＞寺巧巧互指导教师签名：曰期：各句巧马■作者联系电话；电子

5、邮箱：甘庶宿根矮化病病原菌膜蛋白心基因的特性研究摘要关于甘庶宿根矮化病（ＲａｔｏｏｎｓｔｕｎｔｉｎｄｉｓｅａｓｅＲＳＤ的分离培养、多克隆抗体的ｇ，）？制备和捡测己进行相关的研巧，但有关甘薦宿根矮化病病原菌（Ｚｅ诉ｏｍ口巧ｓｕｂ巧．ｘｘ中推测为抗ｃ－ｍａＫｆａｃｔｏｒＡｒａｎｅ巧化ＬｆＫ因子灿ｉｔｉｓｉＲｓｋ的膜蛋白ｍｅｍｂ）ｇ，）（ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｍ巧基因单克隆抗体的制备、检测及遗传转化的研究在国内外尚未见报道一。本研巧在本课题组前期工作的基础上，进步分析对该基因的特异性进行分也Ｃ３４９－ｂ）析，诱导并纯

6、化了去跨膜区域的Ｃ／Ｗ６０基因可读框７１７序列（３８５ｐ编码的蛋白为抗原，通过多次免疫纯种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，获得其单克隆抗体；用该单克隆抗体对细菌总蛋白和感病、健康甘薦样品总蛋白进行检测。构建了该基因的植物表达载体并转入野生型烟草，检测得到烟草转基因植株。本研究结果有助于探讨抗ｏＫ因子基因的功能及其在Ｌｘｘ中的作用。主要结果如下：－Ｉ１、将含有ＺｘＷＷＷ基因的ｐＥＴ３０ａ质粒的菌液，利用ＰＴＧ（浓度０．１ｍＭ）诱－导蛋白表达、４Ｃ预冷的冷冻，收集诱导表达后的菌液于５０ｍＬ的离屯管中，放在经°、上清离也机内，４Ｃ条件下

7、，５０００ｒｐｍ，离屯２０ｍｉｎ，弃尽。并用两种不同的蛋白纯化方法对该蛋白进行纯化并比较分析ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，两种方法，经分析鉴定结果表明均可Ｗ纯化出目的蛋白一，用改进的方法纯化出的蛋白更纯，量更多，并进步透析和浓缩，用紫外分光光度法检测获得的浓缩后蛋白质量浓度，用来做免疫抗原。２、Ｗ秀导表达的蛋白为抗原，通过多次免疫纯种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，获得了单克隆１抗体。ＥＬＩＳＡ检测结果表明：５１２０００。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果表明，该，其效价大于基因在细菌中和感病甘庶样品中表达，在健康甘藤样品中几乎不表达。３、本研究中

8、通过构建了ＺＸＴ７Ｓ４６０基因的植株表达载体，构建完成后并进行了一一相应验证，表明载体可用于下步转化。进步转化烟草获