荧光分光光度计-原理

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1、实用文案分子荧光分析法基本要点：1.理解分子荧光法的基本原理；2.掌握分子荧光发射光谱的特；3.了解荧光光谱仪的组成及各部分作用；4.掌握分子荧光分析法的定量分析方法及主要应用范围。发光光谱：物质分子或原子吸收辐射被激发后，电子以无辐射跃迁至第一电子激发态的最低振动能级，再以辐射的方式释放这一部分能量而产生的光谱称为荧光、磷光。根据物质接受的辐射能量的大小及与辐射作用的质点不同，荧光分析法可分为以下几种：1.X射线荧光分析法用X射线作光源，待测物质的原子受激发后在很短时间内（10-8s）发射波长在X射线范围内的荧光。2.原子荧光分析法：待测元素的原子蒸气吸收辐射激发后，在很短的

2、时间内（10-8s），部分将发生辐射跃迁至基态，这种二次辐射即为荧光，根据其波长可进行定性，根据谱线强度进行定量。荧光的波长如与激发光相同，称为共振荧光。荧光的波长比激发光波长长，称为stokes荧光；若短，称为反stokes荧光。3.分子荧光分析法：有些物质的多原子分子，在用紫外、可见光（或红外光）照射时，也能发射波长在紫外、可见（红外）区荧光，根据其波长及强度可进行定性和定量分析，这就是通常的（分子）荧光分析法。标准文档实用文案·基本原理一.分子荧光的发生过程（一）分子的激发态——单线激发态和三线激发态大多数分子含有偶数电子，在基态时，这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道

3、中，成对自旋，方向相反，电子净自旋等于零：S=½+(-½)=0，其多重性M=2S+1=1(M为磁量子数)，因此，分子是抗（反）磁性的，其能级不受外界磁场影响而分裂，称“单线态”；图1单线基态（A）、单线激发态（B）和三线激发态（C）当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后，被激发跃迁到能量较高的轨道上，通常它的自旋方向不改变，即ÄS=0，则激发态仍是单线态，即“单线(重)激发态”；如果电子在跃迁过程中，还伴随着自旋方向的改变，这时便具有两个自旋不配对的电子，电子净自旋不等于零，而等于1：S=1/2+1/2=1其多重性：M=2S+1=3即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂，这种受激态

4、称为“三线(重)激发态”；“三线激发态”比“单线激发态”能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的，即跃迁几率非常小，只相当于单线态→单线态过程的10-6~10-7。（二）分子去活化过程及荧光的发生：（一个分子的外层电子能级包括S0（基态）和各激发态S1，S2，…..，T1…..，每个电子能级又包括一系列能量非常接近的振动能级）处于激发态的分子不稳定，在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量（辐射或非辐射跃迁）回到激态，这个过程称为“去活化过程”，这些途径为：标准文档实用文案1.振动弛豫：在溶液中，处于激发态的溶质分子与溶剂分子间发生碰撞，把一部分能量以热的形式

5、迅速传递给溶剂分子（环境），在10-11~10-13秒时间回到同一电子激发态的最低振动能级，这一过程称为振动弛豫。图2分子吸收和发射过程的能级图2.内转换：当激发态S2的较低振动能级与S1的较高振动能级的能量相当或重叠时，分子有可能从S2的振动能级以无辐射方式过渡到S1的能量相等的振动能级上，这一无辐射过程称为“内转换”。（“内转换”过程同样也发生在三线激发态的电子能级间）3.外转换：激发态分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用（如碰撞）而以非辐射形式转移掉能量回到基态的过程称“外转换”。4.系间跨跃：当电子单线激发态的最低振动能级与电子三线激发态的较高振动能级相重叠时，发生电子

6、自旋状态改变的S—T跃迁，这一过程称为“系间跨跃”。（含有高原子序数的原子如Br2、I2的分子中，由于分子轨道相互作用大，此过程最为常见。）5.荧光发射：当激发态的分子通过振动驰豫—内转换—振动驰豫到达第一单线激发态的最低振动能级时，第一单线激发态最低振动能级的电子可通过发射辐射（光子）跃回到基态的不同振动能级，此过程称为“荧光发射”。如果荧光几率较高，则发射过程较快，需10-8秒。（它代表荧光的寿命）由于不同电子激发态（S）的不同振动能级相重叠时，内转换发生速度很快（容易），在10-11~1013标准文档实用文案秒内完成，所以通过重叠的振动能级发生内转换的几率要比由高激发态发

7、射荧光的几率大的多，因此，尽管使分子激发的波长有短（l1）有长（l2），但发射荧光的波长只有l3（>l1>l2）。6.磷光发射：第一电子三线激发态最低振动能级的分子以发射辐射（光子）的形式回到基态的不同振动能级，此过程称为“磷光发射”。（磷光的波长l4较荧光的波长l3稍长，发生过程较慢约10-4~10s）由于三线态—单线态的跃迁是禁阻的，三线态寿命比较长，（10-3~10s左右），若没其它过程同它竞争时，磷光的发生就有可能；由于三线态寿命较长，因而发生振动弛豫及外转换的几率也高，失去激发能的