荧光分光光度计课件

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1、光学分析仪器（2）荧光分光度计的原理与应用技术8/3/20211光学分析仪器培训荧光分光光度法光学分析仪器主要是通过电磁波与物质互作用后，物质对电磁辐射产生吸收或再发射，测量所得到的信息来对物质加以研究的分析仪器。这方面的仪器很多,在这里我们主要对紫外—可见分光光度计和荧光分光光读计加以讨论。1、荧光分光光度法简介8/3/20212光学分析仪器培训荧光分光光度法光学分析仪器因为物质对光的选择性吸收的特点，他的吸收有如下的特性M+hM*M+热基态激发态M+荧光或磷光1、荧光分光光度法简介8/3/20213光学分析仪器培

2、训荧光分光光度法原子发射光谱法：原子荧光分析发射光谱法分子发射光谱法：荧光分析、磷光分析光谱分析法原子吸收光谱法：原子吸收分光分析吸收光谱法分子吸收光谱发：紫外可见、红外吸收光谱1、荧光分光光度法简介8/3/20214光学分析仪器培训荧光分光光度法荧光分光光度法当用紫外光照射某种物质时，这些物质会发出各种颜色和不同强度的光，当紫外光停止照射时，这种光线也随之消失。我们这种光线称为荧光。依据物质所发荧光的颜色和强度建立起来的定性和定量的分析方法称为荧光分光光度法。1、荧光分光光度法简介8/3/20215光学分析仪器培训荧光

3、分光光度法荧光的产生：荧光是一种自然现象，在我们的日常生活中到处可以看见。产生荧光的原因是：荧光物质分子吸收了特征频率的能量后，由基态跃迁到激发态，然后内能转换消耗部分能量，返回到最低电子激发态的最低振动能级，再从这个能级返回基态时所发的光，这束光我们称为荧光。荧光发射的能量要比吸收光的能量小（波长要长）。在这里我们用分子能级图就能够很好的理解它的产生过程。1、荧光分光光度法简介8/3/20216光学分析仪器培训荧光分光光度法分子能级图：1、荧光分光光度法简介8/3/20217光学分析仪器培训荧光分光光度法荧光分析仪器的

4、结构和主要部件：2、荧光分光光度计的基本结构光源激发单色器样品室发射单色器检测器显示装置8/3/20218光学分析仪器培训荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.1、光源：对光源的要求是必须有足够的强度且具有连续光谱，其波长范围能满足仪器的需要。大部分仪器由氙灯组成它对能量的要求没有紫外可见分光光度计那么严格。8/3/20219光学分析仪器培训荧光分光光度法2、荧光分光光度法简介2.2、单色器：色器也是荧光分光度计的核心部件。它有两个单色器激发单色器它的作用是将光源发出的白色光色散成各种波长的单色光用于照射样品，发

5、射单色器的作用只让样品发出的荧光通过。8/3/202110光学分析仪器培训荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.3、样品室样品室比较宽大，以容纳各种光径的样品池和附件。如流动池，微量池等。样品池全用石英材料制成，没有玻璃样品池。8/3/202111光学分析仪器培训荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.4、检测器荧光分光光度计常用的是光电检测器。如光电池、光电管、光电倍增管和二极管阵列j检测器。现在大部分是光电管2.5、记录和放大装置：将测量到的荧光强度显示出来。8/3/202112光学分析仪器培训荧光分光

6、光度法荧光分光光度计于紫外-可见分光光度计的区别2、荧光分光光度计的基本结构8/3/202113光学分析仪器培训荧光分光光度法2、荧光分光光度计的基本结构2.6、日立850荧光分光光度计光路图：（8/3/202114光学分析仪器培训荧光分光光度法3、荧光分光光度法的特点3.1、特点有以下几点：（1）灵敏度高荧光分析的最大特点是灵敏度高，通常比紫外可见光度计高出2—3个数量级。（2）选择性强荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。因此确定恰当的激发光谱和发射波长，能达到很高的选择。8/3/202115光学分析仪器培训荧光分光光度

7、法3、荧光分光光度法的特点（3）试样量少和方法简单由于荧光分析法灵敏度高，因而分析时需试样量较小。特别在使用微量池时，用样量可以大大减小。（4）能获得更多的信息荧光分析可提供激发光谱、发射光谱、荧光强度、总荧光量、峰位、谱带宽度、量子产率、荧光寿命等参数。8/3/202116光学分析仪器培训荧光分光光度法3、荧光分光光度法的特点（5）受外界影响较大外界因素如温度、PH值、溶剂和其它因素都可能显著地影响分析结果。其中温度对他的影响最大，这也是荧光分析需标准的原因。8/3/202117光学分析仪器培训荧光分光光度法3、荧光分

8、光光度法的特点3.2、荧光分光光度法的发展近年来，荧光分光度计随着新技术的的采用，发展非常快，特别是计算机和其它先进技术应用的引入，是荧光光度计发生了根本的变化，相应的分析方法也得到很快的发展，象激光荧光分析技术、时间分辨荧光分光光度法、同步荧光分析法，这些又大的推动了分析方法在理论和应用方面的进展。同时促进荧光分析