《植物脱毒快繁技术》PPT课件

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1、第五章、植物离体脱毒快繁技术一、病毒危害多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如，草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移，侵染病毒的种类越来越多。植物病毒病原体可通过维管束传导。因此，对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后，就会代代相传越趋严重。受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效药。种子一般不带病毒(豆类植物除外)，种子繁殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须

2、采取一些特殊方法脱除病毒。脱毒快繁的一般过程1、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类2、茎尖培养脱毒或结合热处理3、鉴定4、繁殖5、驯化移植1、热处理脱毒原理：①病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。二、脱毒方法(一)热处理脱毒依据病毒对高温的敏感，寄主耐高

3、温。利用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低，传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存活，并加快分裂和生长。(1)温汤浸渍处理(2)热空气处理2、热处理脱毒方法（1）温水浸渍处理适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。（2）热空气处理热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生长的盆栽植株移入温热治疗箱内，一般35-40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊花等植物。如：葡萄置于38℃可去除扇叶

4、病毒。热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效果更好。植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。（二）茎尖培养脱毒1、茎尖培养脱毒原理病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）几乎不含或含病毒很少。1、传导抑制。植物体病毒的移动主要靠2条途径：

5、一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分裂和活跃的生长速度。2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系，存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。茎尖分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。4、抑制因子存在。在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”（抑制因子假说），在分生组织

6、中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。2、培养基一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎尖时，有些离子浓度过高应稀释。在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些植物茎尖培养有用。材料选择、消毒微茎尖的剥取接种3、茎尖的培养方法3、茎尖的培养方法需要一台解剖镜（8-40倍）。剥离茎尖要迅速并尽快接种，或

7、在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的污染率。即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10min。茎尖长（ｍｍ）叶原基数小植株数脱毒植株数脱毒率（％）0.1215024480.272421842.90.646400离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响切取茎尖越小脱毒效果越好，但太小不易成活，过大又不能保

8、证完全除去病毒，所以茎尖大小要合适。剥取茎尖过程:解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒。当一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将带1-2个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。   将接种的茎尖置于22℃左右温度下。2000-3000lx1