睾丸巨噬细胞对睾丸间质细胞功能和形态影响的体外研究

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1、中文撼要警丸豳隧细臆对睾丸闻旗缨艟功麓秘形态影瞧的体外研究攘要强豹：本实验应嬲缨憝漤葵、髓染色、缀缓纯学染色、磁分离均稚酶联免疫(磁酶兔)塞醺定慧测定法等技术方法，黟}究了经嚣多糖(1ipopolysaceharide，Lps≥激活成未激活酶睾丸蚕噬细胞(testicularmaerophage,TM)及羧藏题缆纲胞(peritonealmacrophage，PM)对睾丸闻餍缀施(Leydig细胞)的俸外作弼。主要躐察不同浓度酌匿噬细胞培养基(macrophag-eonditionedmedia。MCM)巍不同时间对Leydig缨施分泌的基础搴酮的影噙，

2、以及对kyd遮细胞形态的影响，阏时对匮噬细胞分泌欧一糖细胞因子一妇缎憝分素一l(interleukin-1，融1)的律耀也进毒亍了分辑，以期递一步了嬲肇丸在生璎及病理状态下TM与Leydig细胞糊嚣{箬臻豹飙潮，探讨黎丸垒精擞琢境维持期紊乱的影响睡索，必临床诊浚免疫性不薅提供参考。方法：实验逡惩爨藤残年雄牲Wistar大簸，髂蓬2009左右，分离褥到攀丸驻瞧缨腿、黢黢匝噬潮胞及Leydig纲藏，逑行以下辨究：1分烈刽餐LPS(501&g／m1)激活24h慧鬻丸戏羧麓豳滋缀臆条释培莽基(毛怒一TMCM-24h、LPS-PMCM24h)、LPS激活48h酶肇

3、丸蠛腹腔醺噬绥箍条件臻莽基(LPS一喇eM一48h、LPS—PMCM-48h)；阏对制备来翮中文糖要LPS豹TM及PM培养土清，分别得到TMCM-24h、PMCM．24h、TMCM．48h和PMCM．48h四种条件培养基。2每组分不霹浓度<8％、5％、10％、20％、30％、40％和50％，即MCM占24孔培养板每孔液体总体积的百分文)分裂热入Leydig缀艇培养基肉，劳设立只加LPS的空白组(观察LPS对Leydig细胞有没有点接作用)，24h蜃取土渚，鼹瑞±霉兰谌l墼波分泌定量溅定铰溅量Leydig细胞上清中的睾酮含量。确定阪噬细胞条件培养基酶最佳刺

4、激浓度。3按照以上得到的最饯浓度测定LPS-TMCM一24h在不丽糖闯离(1h、6h、l赫、24h、48h、72h，霹从加入LPS-TMCM-24h开始计时)对Leydig细胞上清犟酮含量的影响，确定最佳刺激对间；同时设立对照组(单独培养Leydig细胞，不如LPS-TMCM-24h)。4入重缀lL—lp作为单独的影响因索，加入kydig细胞魂，测量方法鄹上。5Leydig细胞分两缀，一组单独培养，一缀加入LPS-TMCM-24h，应爨计数法测定培养24h、48h、72h、96h和120h的Leydig细胞的数量，比较两组细胞增殖豹祷提。6Leydig细

5、胞中分别加入”S．TMCM．24h、臻S．P鹾CM-24h、骚莲CM一烈h、麟CM-24h、乳l鞠设立对照组，培养24h后进行HE染色。7部分Leydig缨麓培莽子24魏叛孛懿玻璃盖黄土，分两组，一组作对照，一纽加入LPS．TMCM．24h，培游24h鑫进行飘酸脱氢酶(LD}壬)染色。续果经计算机豳象分中文摘要析系统遴行缨艇阳性爱应颗粒光密发(反映缨貔凌该酶的活性)测定。8所毒结果经SPSSt0．0统诗分糈软孝}逶行统计学处理。罐酮值和细胞计数值多组间比较皮崩方差分析，两组阚细胞鬻性反应颗粒毙密度院较应耀t稔验。结聚：1分离纲脆及纯度鉴定1．1总的睾丸间

6、质内的细胞：经过I型胶原酶及机械法的作用，大部分闻质内的细胞都已经消纯下来，而曲细糖管保持完整，表面光滑，基本没有断裂。1．2刑：培养30rain聪TM迅速贴璧，呈圆形或椭圆形，细胞周边部可见小的突起，整个细胞中间稍厚，魉周较薄，呈油煎蛋样。非特异性酯酶(NsE)染色鉴定阳性率达90％以上。1．3PM：培养30rain后PM迅速贴壁，形态多样，有圆形、糖躐形、妖梭形等，可戆与其厥处的功缝状态不固有关。NSE染色阳性率95％以上。1．4Leydig缨魏；培养24h纛，活蠛鑫抒黪Leydig纲麓大部分已贴壁，典型的呈多边形、三角形，核大，胞质鏊均匀黪缨鬏粒状

7、，糕差曼微镜下霹冤菇缨夺璃一的脂滴。3S羟胆圃醇脱氢酶(30。HSD)染色阳性率达80％以上。2最佳刺激浓度的确定2．1LPS—TMCM-24h使k刚埝细脆上清中辜醺含量增加，对Leydig细胞糕础睾嗣合成具有促进作用，其中LPS—TMCM-24h浓度为20％时达到最大值(0．412±中文摘要0．052ng／m1)，与对照组(0．201_4-0．039ng／m1)比较P<0．01，即20％为最佳刺激浓度。2．2LPS．PMCM．24h、TMCM．48h使Leydig细胞上清中睾酮含量减少，对Leydig细胞基础睾酮合成具有抑制作用。其中LPS—PMCM一

8、24h浓度为20％、30％、40％、50％时其睾酮含量分别为0．270±0．07