《黄曲霉毒素检测》PPT课件

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1、黄曲霉素检测黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素十分耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。黄曲霉毒素介绍黄曲霉毒素分布范围广黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果（特别是花生和核桃中）中。日常检验发现在大豆、谷物、玉米、通心粉

2、、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素（其中以花生和玉米污染最严重）。毒性极强黄曲霉毒素进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布在肝脏、肾脏。因此主要引发肝癌、胃癌等，还可以诱发骨癌、肾癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌等。黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周将大部分排出。只有严重霉变的粮食才可能会含有大量毒素，导致急性毒性。耐热性强在一般的烹调加工温度下，黄曲霉毒素被破坏的很少；即使是200℃高温加热，也不能完全正确破坏。一般黄曲霉毒素的裂解温度为280℃，黄曲霉毒素B1

3、的裂解温度为268℃。黄曲霉毒素的种类迄今为止发现的黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、C1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M1的毒性和致癌性与黄曲霉毒素B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食品，所以其危害性更

4、大。中国食品中黄曲霉毒素的限量标准标准食品种类最大限量GB2761-81玉米、花生仁、花生油20μg/kg大米、其他食用油10μg/kg其他粮食豆类、发酵食品5μg/kg婴儿代乳食品不得检出GB9676-88牛乳及其制品0.5μg/kg黄曲霉毒素的检测方法目前，测定食品中的黄曲霉毒素的方法有：薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、亲和层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。这些方法或多或少都具有如下不足之处：（1）、在操作过程中，需要使用剧毒的黄曲霉毒素M1作为标定标准物，对操作人员造成巨大的沾污

5、危险，而且黄曲霉毒素M1标准物质购买十分困难。（2）、操作过程烦琐、复杂、时间长，劳动强度大。（3）、仪器设备昂贵、笨重、操作复杂，难以实现现场快速分析。（4）、灵敏度较差，重复性很难得到满意结果。薄层色谱法（TLC）其原理是:样品经提取、浓缩、薄层分离后,在365nm波长的紫外光照射下,黄曲霉毒素B1、B2产生紫色荧光,G1、G2产生绿色荧光,然后根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。优点是:所用的试剂、设备简单,费用低廉,容易掌握,适用大量样品的分离、筛选,一般的实验室均可开展,属于定性和半定

6、量的功能。高效液相色谱法(HPLC)以C18柱为固定相,以水+异丙醇+乙腈(80+12+8)为流动相,用荧光检测器进行检测,其激发波长365nm,发射波长450nm,以保留时间定性，峰面积定量，这些基本参数大致相同，但在流动相的选用上却差异较大。样品用甲醇和水混合液进行萃取,随后进行衍生化处理,处理后溶解于流动相,进行液相色谱测定。酶联免疫吸附法(ELISA)是抗原(抗体)吸附剂和用酶标记的抗体(抗原)与标本中的待测物(抗原和抗体)起特异的免疫学反应，用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度。大致采用两种方式

7、检测黄曲霉毒素，一种是用双抗体夹心法，另一种是用竞争法。微柱法测定黄曲霉毒素，是利用微柱管内的硅镁型吸附剂吸附黄曲霉毒素并在365 nm紫外光下显示荧光，其强度与一定浓度的黄曲霉毒素含量成正比关系，由此可简略定量黄曲霉毒素。金标试纸法金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法,可一步式检测AFT。一步式AFT快速检测纸法可在5~10min完成对样品中AFB1的定性测定,具有简单、快速、灵敏度高等特点,无须仪器设备配合测定,检测既可在实验室中进行,也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定,对黄曲霉毒素定

8、性检测准确度在85%以上,灵敏度为4ng/mL,可测出样品中20ng/g的黄曲霉毒素[10]。SunXiulan等合成一种对AFB1具有特异性的抗体金标探针,该纳米金标探针用于免疫色谱法对AFB1分析,完成一个样品分析所需要的时间少于10min,比ELISA少6~10min,在标准品的对照下,最低检测限可达2.5ng/mL生物鉴定法利用AFT能影响微生物、水生动物及家禽等生物体的细胞代谢,来鉴定AFT的存在,其特点是待检样品不