临床血流感染患者金黄色葡萄球菌耐药机制及分子流行病学研究

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1、分类号：R446．S妻位类蒹科学学位／专业学位口学位类别：科学学位日专业学位口同学校代码：1062学号：2010602373学科门类：医学又肄眚科鼻等硕士学位论文MLASTER’SDISSERTATION论文题目：临床血流感染患者金黄色葡萄球菌耐药机制及分子流行病学研究TITLEStudyonresistancemechanismsandmolecularepidemiologyofStaphylococcusaureusisolatedfrompatientswithbloodstreaminfections一级学科：临床医学二级学科：临床检验诊断学

2、论文作者：王立新指导教师：胡志东主任技师天津医科大学研究生院二。一三年五月天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的调查我院临床血流感染患者分离的金黄色葡萄球菌对各类抗菌药物的敏感性及其耐药机制，了解多种耐药基因及毒力基因的分布情况，分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)医院内感染的分子流行病学特征，指导临床有效控制该菌在医院内的传播。方法收集2006年1月至2011年8月天津医科大学总医院临床分离的非重复血流感染的金黄色葡萄球菌60株，应用Vitek-2compact细菌自动分析系统及配套鉴定卡、药敏卡对细菌进行菌种鉴定及药敏试验；头孢西丁纸片扩散法筛选

3、MRSA；应用聚合酶链反应(PCR)方法检测耐药基因mecA基因、红霉素核糖体甲基化酶基因(ermA，ermB，ermC)、氨基糖苷类修饰酶基因(aac(6’)／aph(2”)、aph(3’)．Ⅲ、ant(4川4’))、耐消毒剂基因(qacA)和毒力基因杀白细胞素基因(pvl)、肠毒素基因(sea、seb、secl、sed、see)及中毒性休克综合征毒素．1基因(tst)。选取PCR阳性产物进行测序，并与GenBank在线数据库进行比对。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术和SCCmec分型技术对MRSA进行分子流行病学研究，确定菌株的流行情况及菌株间的

4、亲缘关系。结果(1)60株金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺、替加环素、替考拉宁敏感率为100．O％，对莫西沙星、利福平、左氧氟沙星、头孢西丁、苯唑西林的敏感率大于78．O％，对青霉素、红霉素、克林霉素敏感率低于40．O％。头孢西丁耐药菌株13株(21．7％)，判定为MRSA。(2)PCR检测结果表明，60株金黄色葡萄球菌携带耐药基因mecA13株(21．7％)、ermA10株(16．7％)、ermB18株(30．0％)、ermC18株(30．O％)、aac(6’)／aph(2”)26株(43．3％)、aph(3，)．Ⅲ6株(10．O％)、qacA3株

5、(5．0％)。ermA、qacA只在MRSA中检出，ermC、aac(6’)／aph(2”)、aph(3’)一Ⅲ三种基因在MRSA中的检出率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)，携带ermB的菌株全部为MSSA，所有菌株中均未检出ant(4'4”)基因。(3)60株金黄色葡萄球菌中毒力基因检测结果为pvl4株(6．7％)、sea20株(33．3％)、seb3株(5．O％)、secl9株(15．0％)、sed7株(11．7％)，未检出see及tst基因。MRSA只携带sea一种毒素基因并且检出率高于MSSA，其它4种毒素基因pvl、seb、SOCl

6、、sed只在MSSA中检出。6株同时携带secl和sed两种毒素基因，2株同时携带sea和secl基因，1株同时携带sea和sed基因。阳性PCR产物经测序后与GenBank数据库比对均为目的基因。(4)SCCmec天津医科大学硕士学位论文分型结果显示11株MRSA为SCCmecm型，2株未能分型。(5)PFGE分型结果显示13株MRSA分为4型(A．D)其中A型2株、A1型2株、A2型1株、A3型l株、A4型2株、A5型1株、B型2株、C型1株、D型1株。结论本次研究的临床血流感染患者金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺、替加环素、替考拉宁敏感率均为1

7、00％，莫西沙星、利福平、左氧氟沙星、头孢西丁、苯唑西林敏感率较高，对青霉素、红霉素、克林霉素敏感率低。血流感染金黄色葡萄球菌同时携带多种耐药基因和毒素基因，MRSA携带耐药基因的种类多于MSSA，但是MSSA携带毒素基因种类多于MRSA。血流感染金黄色葡萄球菌携带的erm基因和aac(6')／aph(2”)基因分别是引起大环内酯类抗菌药物和氨基糖苷类抗茵药物耐药的主要机制。PFGE分型和SCCmcc分型结果提示MRSA菌株存在医院内的散在克隆传播现象，并主要为SCCmeclll型。关键词：金黄色葡萄球菌耐药基因毒力基因血流感染脉冲场凝胶电泳SCCme

8、c分型天津医科大学硕士学位论文AbstractObjectiveThestudywascond