培养基的配制

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1、实验五 微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。半合成培养基：由一部分纯化学物质

2、和另一部分天然物质配制而成。天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在

3、常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。一、目的要求l.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。二、实验材料1.药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。2.高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。3.其它：天平、牛角匙、电炉、1NHCl、

4、1NNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。三、实验程序（一）、培养基配制l.培养基配制的一般方法和步骤（1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根据实验需要加入蒸馏水或自来水），用玻棒搅匀，加热溶解。（3）调pH值（调pH也可以在加琼脂后再调），用1NNaOH或1NHCl调pH，用pH试纸对照。表6-1琼脂和明胶的特性比较（4）加琼脂溶化，在琼脂溶

5、化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦，待完全溶化后，补足所失水分，一般数量少，时间短不必补水。（5）分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装置为管高的1／5特别注意不要使培养基粘污在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染。（6）包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后，塞上棉塞，用防水纸包扎成捆挂上所配培养基名称的标签。（7）灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后取出，摆成斜面（见图6-1）。培养基经灭菌后，必须放在37℃恒温培养箱中培养24h，如确无菌生长、方可使用。图6-1灭菌的试管培

6、养基趁热摆成斜面2．三种培养基的配方及具体配制方法（1）.牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）。配方：牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠3g琼脂20g自来水1000mLpH7.2~7.4灭菌l.05kg／cm2，25~30min 本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化钠。以配制200mL培养基为例。吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化钠2mL；加入有刻度的搪瓷烧杯中，然后用自来水补足到200mL。用玻棒搅匀，在电炉上稍加热，调pH至7.4，加

7、琼脂4g，加热熔化，用玻棒不断搅拌，至琼脂完全溶解为止，趁热在漏斗架上装试管，（见图6－2）。装带有棉塞的无菌试管，装置1／5的试管高度共12支，作斜面培养基、用铝壳试管帽的里装10mL。约试管高度的1／2以上，用作分离时倒平板用。图6-2分装培养基图6-3将培养基试管包扎成捆分装完毕，以12支为一捆，用防水纸包扎成捆（图6-3），挂上标签，灭菌备用。（2）.马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基）。配方：去皮马铃薯（或鲜豆芽）200g蔗糖（或葡萄糖）20g自来水1000

8、mL琼脂20gpH天然 灭菌（含蔗糖）1.05kg/cm220min（含葡萄糖）0.1kg/cm230min 制备方法配制200mL培养基为例取上皮马铃薯40g，切成小块、放入无刻度的搪瓷杯中，加水200mL，置电炉上加热煮沸10min，用4层纱布过滤至具刻度的搪瓷杯中，滤液加水补足至200mL。然后加蔗糖4g，加琼