黄酮类化合物的检识与结构鉴定

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1、第四节　黄酮类化合物的检识与结构鉴定目前主要采用的方法有：①与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf100）②分析对比样品在甲醇溶液中及加入诊断试剂后得到的UV光谱③1H-NMR④13C-NMR⑤MS一、色谱在黄酮类鉴定中的应用1.纸层析(PPC)苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性溶剂，如BAW系统（正丁醇：醋酸：水4：1：5上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（3：6：1）苷元则多采用醇性溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。显色剂：2%三氯化铝甲醇液（紫外光下检测）；1%Fe

2、Cl3/1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。2.薄层层析(TLC)１）硅胶薄层用于弱极性黄酮较好。常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。２）聚酰胺层析适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。常用展开系统：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（1：1）等。二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。一般程序：①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱和可见光谱以了解3,5,7,3’,4’有无羟

3、基及邻二酚羟基；③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁所引起。BB带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。AA带II(240-285nm)（苯甲酰系统）带I(300-400nm)桂皮酰系统类型说明250-285304-350黄酮类-OH越多，带I带II越红移B环3’,4’有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰）328-357黄酮醇类

4、(3-OR)352-385黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类二氢黄酮（醇）B环上有-OH,OCH3对带I影响不大220-270340-390或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类查耳酮2’-OH使带I红移的影响最大370-430(3-4个小峰)橙酮类不同类型黄酮类化合物的紫外光谱2．加入诊断试剂后引起的位移及结构测定加入试剂带II带I说明样品+MeOH（黄酮类及黄酮醇类）250-285304-385两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)有关，-O

5、H,-OCH3越多，越长移+NaOMeA环有-OH，红移小，无意义40-60nm（不变或增强）50-60nm（下降）有4’-OH，无3-OH有3-OH，无4’-OH有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减更快）7-OH带I，II随加NaOMe时间延长，逐渐衰减320-330nm有吸收，成苷后消失+NaOAc(未熔融)5-20在长波一侧有明显的肩峰7-OH+NaOAc(熔融)40~65有4’-OH+NaOAc/H3BO35-1012-30有6,7-OH或7,8-OH(5,6-OH无)B环有邻二酚羟基AlCl3

6、/HCl6050-6035-5517-200有3-OH有3,5-二OH有5-OH，无3-OH有6-OR无3-OH,5-OHAlCl3光谱-AlCl3/HCl光谱30-4050-650B环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基说明：（1）+NaOMe或NaOAc,OHONa，变为离子化合物，共轭系统中的电子云密度增加，红移另有3,4’-OH或3,3’,4’-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。（2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解离。（3）形成络合物的能力：黄酮醇3

7、-OH>黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）>邻二酚羟基>二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合；但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合；形成络合物越稳定，红移越多。（4）根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟基的取代情况。山柰苷山柰酚UVλmax(nm)带II带I带II带IMeOH265345267367NaOMe265388278416（分解）AlCl3275399268424AlCl3/HCl275399269424NaOAc265399

8、276387NaOAc/H3BO3265345267367从中药柴胡中分离得到山柰苷，经酸水解后，用PC检出有鼠李糖，山柰苷及山柰酚的紫外光谱数据如下：山柰酚3，7-二鼠李糖苷三、1H-NMR常用溶剂：氘代氯仿（CDDl3），氘代二甲基亚砜（DMSO-d6），氘代吡啶（C5D