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《基因敲除技术现状及应用06342》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、医学分子生物学杂志,2007,4(1):86290JMedMolBiol,2007,4(1):86290基因敲除技术现状及应用万海英综述汤华审阅天津医科大学天津市生命科学中心实验室天津市,300070【摘要】功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中Cre2LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型,实现特定基因在特定时间和(或)空间的功能研究;转座子系统易于操作,所需时间短,具有高通量的特点,可以携带多种抗性标记,方便了同时进
2、行多基因功能研究;基因捕获技术提供了获得基因敲除小鼠的高效方法,方便了进行小鼠基因组文库的研究。此外,进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交换法也从不同方向发展了基因敲除技术。【关键词】基因敲除;Cre2LoxP系统;转座子;基因捕获【中图分类号】R34918StatusQuoandApplicationofGeneKnockoutWANHaiying,TANGHuaTianjinMedicalUniversity,TianjinLifeScienceCenter,Tianjin,300070,Chin
3、a【Abstract】Geneknockoutisimportantforfunctionalgenomics1Greatprogresshasbeenmadeinthevectorconstructionofgeneknockout,screeningofaimedcellsandanimalmodelsandthedevelop2mentsinthesefieldshelptosolvetheproblemsinthestudyofgenomicfunctions1Cre2LoxPsystemcaneffecti
4、velycontrolthedevelopmentstageandhistologyofgeneknockout,therebymakingitpossi2bletostudygenefunctioninagiventimeand/orspace1Transposonsystemiseasytomanipulate,quickandcanachievehighthroughput,carrymultipleresistancemarkergene,whichmakessimulta2neousstudyofmulti
5、plegenespossible1Genetrappingprovidesahighlyefficientmethodofobtainknockoutmiceandcanfacilitatetheresearchofmicegenomiclibrary1Inaddition,thetechniquessuchas“hitandrun”,“doublereplacement”,“tagandexchange”and“recombinase2mediatedcas2setteexchange”allcontributet
6、othedevelopmentofgeneknockouttechnology1【Keywords】geneknockout,Cre2LoxPsystem,transposon;genetrapping基因敲除又称为基因打靶,是指从分子水平上胞核内;③筛选目的细胞;④转基因动物。将一个基因去除或替代,然后从整体观察实验动物,基因敲除传统的重组载体主要有插入性载体系推测相应基因功能的实验方法。基因敲除技术是功统和替换性载体系统。插入性载体系统构建载体时能基因组学研究的重要研究工具。主要包括要插入的基因片段(目的基因)、
7、同源序基因敲除技术是在20世纪80年代后半期应用列片段、标志基因片段等成分,替换性载体系统主DNA同源重组原理发展起来的。胚胎干细胞(em2要包括同源序列片段、替换基因的启动子、报道基bryonicstemcell,ES细胞)分离和体外培养的成功因等成分。基于正负双向筛选(positiveandnegative及哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除selection,PNS)策略的传统方法的基因敲除需要满[1]的技术基础和理论基础。基因敲除主要包括下列足:对基因组提取处理用于构建载体;需要位于打技术:①构建重组
8、载体;②重组DNA转入受体细靶区两翼的具有特异性和足够长度的同源片段,并便于用其作为探针用Southern印迹证实;neo基因通讯作者:汤华(电话:022223542603,E2mail:htang2002@yahoo1(新霉素磷酸转移酶基因)的整合;同源重组区域com)外侧tk基因(胸苷激酶基因)在随机重组时的活Correspondingau
