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1、华北农学报2008,23(增刊):78-83抑制性差减杂交技术(SSH)在植物学研究中的应用阎爱华,王冬梅(河北农业大学生命科学学院,河北保定071001)摘要:抑制性差减杂交是一种基于转录水平的杂交技术,能将差异表达基因扩增千倍后富集,具有高效、灵敏、操作简单,假阳性率低等特点,已经越来越多的被应用在植物学研究领域。就该技术的原理、特点及其在植物学方面的应用研究进展作一简要介绍。关键词:抑制性差减杂交;差异表达;植物学中图分类号:Q32文献标识码:A文章编号:1000-7091(2008)增刊-00
2、78-06ApplicationofSuppressionSubtractiveHybridizationTechniqueinPlantFieldYANA-ihua,WANGDong-mei(CollegeofLifeScience,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001,China)Abstract:Suppressionsubtractivehybridization(SSH)isahybridizationtechniquebasedontranscripti
3、onallevel,itcouldidentifyandcollectdifferentexpressedgenesbyamplifythedifferentgenesover1000times.Becauseoftheadvan-tageofthetechniqueincludinghighefficiency,highsensitiveness,simpleoperationandlowfalsepositiverate,itsapplica-tioninplantisbroadlymoreandmore.Thi
4、spaperrevieweditsworkingfoundation,charactersandapplicationinplantre-search.Keywords:SSH;Differentexpressedgenes;Botany植物各种组织细胞的生物学功能是由基因调控1抑制性差减杂交技术的原理的,而基因的表达受植物所处的生理时期、生长状态以及环境条件等多方面的因素影响。基因按时间和SSH技术是由Diatchenko等于1996年发明,是空间顺序的表达被称为基因的差异表达。植物基因一种转录水平上的基于抑
5、制PCR和差减杂交分离的差异表达表现在两个方面,即基因表达的种类和基因尤其是低丰度表达基因的差异表达技术。该方数量水平,这两方面的变化构成了植物细胞在不同法运用二级动力学原理,通过一次杂交可以使低丰生长发育状态,不同组织类型,应对不同逆境条件时度表达序列得到高于1000倍的扩增,同时有效抑的分子调控网络,是调控植物生命活动的核心机制,制非目标序列的非特异性扩增。因此,明确不同类型植物细胞在特定时期的基因表SSH需要经过两次差减杂交,两次抑制性PCR达差异及其调控过程,对阐明生命发生的过程和机的过程,具体步骤如下:理、
6、确定基因功能、分离克隆目的基因、改良植物性首先将需要检测的样品(Tester)和对照样品状具有重要意义。(Driver)的mRNA分别转录成cDNA,然后用酶切成随着分子生物学实验技术的不断发展,研究基大小适合的具有平齐末端的cDNA片段。把Tester因差异表达的相关技术也层出不穷,其中抑制性差平均分成两份,再分别加上不同接头(Adapter1和减杂交(Suppressionsubtractivehybridization,SSH)技术Adapter2R),通过与过量的Driver进行第一次杂交将由于其显著的特点应
7、用十分广泛,就其技术原理和双方的共同片段去除,实现Tester中差异片段的均在植物学研究领域的应用情况作一简要概述。等化。然后合并上述两份杂交产物,加上新变性的收稿日期:2008-08-11基金项目:国家自然科学基金资助项目(30671244);河北省应有基础研究计划重点基础研究项目资助(08965505D);河北省自然科学基金资助(C2005000220;C2007000515)作者简介:阎爱华(1980-),女,河北邯郸人,博士,主要从事小麦抗病机制的研究工作。通讯作者:王冬梅(1963-),女,河北景县人,教授
8、,博士,博士生导师,主要从事植物抗病生理及细胞结构与功能研究。增刊阎爱华等:抑制性差减杂交技术(SSH)在植物学研究中的应用79Driver单链,再次杂交,产生两端具有不同接头的(DifferentialdisplayreversePCR,DDRT-PCR)开始,到cDNA片段。补齐cDNA片段的粘性末端,利用根据目前已有许多不同的技术方法被
