抑制差减杂交技术原理及常见操作结果分析

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1、第"1卷第,期黄冈师范学院学报345("164(,"##GG1G年G’G月GGGGGGGGGGGGGGGG74G89G:G;5G4G<=G8G;G:>G>;G:G>G6G49G?G;5G@G:GABGC9GDAGEFGGGGGGGGGGGGGGGGG78G:(G"G##G1G抑制差减杂交技术原理及常见操作结果分析夏启中&)张明菊&)张献龙".&(黄冈职业技术学院生物工程系)湖北黄州$,+##"H"(华中农业大学作物改良国家重点实验室)湖北武汉$,##0#2摘要!抑制差减杂交.I8JJ9CDDA4:I8KE9;LEABC=FK9A

2、MAN;EA4:)II=2是一种高效鉴定和分离克隆差异表达基因的新技术O目前)该技术在分子生物学研究的各个领域得到了广泛的应用O本文对II=的技术原理P差减LQ6/文库构建的技术流程P常见问题分析及优缺点等作了较全面的介绍)可为研究者们提供参考O关键词!抑制差减杂交H差减LQ6/文库构建H操作结果分析H优缺点中图分类号!R,,&文献标识码!/文章编号!&##,%+#0+."##12#,%##,#%#$STUVWUXYZ[V][VUX^Y[_U‘VTZa^Y_[V[YbaUac‘Ta^XXTZaaU‘Va^d_T[W_UeZfb

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6、KCA:>}AMC5F;JJ5ACMA:EvCF("Zb#‘Ta!II=HD8KE9;LEABCLQ6/5AK9;9FL4:DE98LEA4:H9CD85E;:;5FDADH?C9AE;:MMC?C9AE生物的生长P发育P代谢P繁殖和死亡等生命活动都是由不同的基因表达来控制的)一般认为某一时期的表达基因的数量约为全部基因的&(1$)所以基因的表达具有时空性和组织特异性O研究基因的差异表达)可探究造成生物细胞表型差异的遗传原因)提供研究复杂生命过程的基本信息O研究差异表达基因的方法很多

7、%&)"&%,&)如组织或特异时期的同工酶谱分析P差减杂交.D8KE9;LEABCvFK9AMAN;EA4:)I=2P?’6/差别显示法.MA<

8、’&O(抑制差减杂交技术原理抑制差减杂交技术.II=2是由QA;ELvC:)4等建立的以抑制性*w’和Q6/差减杂交方法相结合收稿日期!"##$%&"%#’(作者简介!夏启中)男)副教授)在读博士研究生)主要从事植物分子生物学研究(基金项目!国家*+’,-项目."##"//"#0#’12(第E期夏启中2等%抑制差减杂交技术原理及常见操作结果分析DE’D的方法!"#$其依据的主要技术有两点%&’(消减杂交)&*(抑制+,-$经抑制差减杂交后的./01群体不仅富集了差异表达基因&目的基因(2而且目的基因间丰度的差异经过均等化作用已基

9、本消除2使消减后的./01群体为丰度一致的目的基因群体$334的基本过程是%抽提两种不同来源组织的5-01&678679和:9;<79(2反转录成./012用=碱基识别酶&-8>?(或4>7???酶切两种./01产生平端片段)将678679./01分成均等的两份