动物疫病监测采样技术

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1、动物疫病监测的采样技术2009年6月11日1动物疫病监测定义：调查动物群体中某种疫病或病原的存在情况。通过监测可以了解动物疫病的流行现状、危害程度、风险因子和发展趋势，早期识别疫病的爆发和流行。根据信息来源分为：问卷调查和实验室监测。实验室监测的关键:样品和检测技术。2实验室检测技术病原检测：病原本身检测，病原特有蛋白检测，病原特有核酸检测，动物试验抗体检测：琼扩，试管凝集，平板凝集，血凝和血凝抑制，中和试验，各种ELISA等。在检测技术过关的情况下，监测结果是否具有代表性，是否能够真实反映出疫病的真实情况都与监测样品的采集有

2、重要关系。34一、样品存在的问题样品的真实性（假样品，一个样品分开）样品的质量（溶血，腐败，反复冻融）采样单填写的信息不全（畜禽日龄，免疫情况等）组织样品采集的太大，不专业。每一种类的样品用一个采样单。样品编号不能追溯回去。5二、样品的种类血液样品：血清，全血抗凝血，血浆组织样品：心肝脾肺肾脑，淋巴结，扁桃体粪便样品：新鲜，湿润的生殖道和精液样品皮肤样品：皮屑分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水泡液6血液样品血液：最常用的样品，可以做血清学试验的样品，也可以作为病原学试验的样品。全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸橼酸钠和4

3、%EDTA，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。血清：不加抗凝剂的血液，在室温静置2~4h（或37℃1h），待血液完全凝固后，析出上清即为血清。血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即为血浆。7检测样品的分类细菌学检测样品：采集发病典型或刚死亡的整体动物送实验室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。病毒学检测样品：病毒检测应在动物病初、体温升高期间采集。以组织脏器、血液、粪便等样品为主。冷藏或冷冻，保存液中加抗生素。血清学检测样品：静脉采血3ml左右，注射器内留一定空间，静置过程或已凝固的血液应低温冷冻，以免溶血。短时间内，可在4度左

4、右保存；如时间较长应冻结保存，注意不能反复冻融.病理学检测样品：保证样品新鲜，应选择病变最典型最明显的部位，且连同部分健康组织一并采集。浸泡于酒精或福尔马林溶液中，冷藏保存和运输。8几种重要疫病的采样时机禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔咽喉棉拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管，肺脏，肾脏等口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌物和咽喉棉拭子猪瘟，猪伪狂犬，蓝耳病：全血，血清，组织病料：肺脏，脾脏，淋巴结，扁桃体，流产胎衣等，新鲜精液或冷冻精液猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。9三、高品质样品的特征

5、样品标记明确样品新鲜采样单填写规范样本样品数量适当10四、如何得到高质量的样品111、采样前的准备-器具采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，酒精灯，酒精棉，棉签，保定动物专用工具样品存放用具：塑料离心管（1.5，2，5ml），自封口样品袋，试管架，塑料样品盒，胶布，封口膜，冰袋。防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。记录用具：不干胶标签、圆珠笔、油性记号笔、采样单、记录本等122、采样前准备—采样技术血液样品：牛、马、羊从颈静脉或尾静脉采血；猪从前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽取；家禽从翅静脉抽取。棉拭子样

6、品：泄殖腔，咽喉，鼻腔水泡皮及水泡液：O/P液：保定，左手拉出舌头或从嘴的一侧按住舌头，右手缓慢放入探杯。组织样品：解剖，洁净取样。13血液样品的分离方法抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加抗凝剂，运输时必须减少震荡以免溶血。非抗凝血：分离血清血清析出好的因素：容器：玻璃试管优于塑料离心管；斜面：与空气接触面要大。温度：最佳温度是体温；时间：室温静置最短2小时；离心：转速要低，2000转。胶冻状血清的成因：采血前刚刚喂食（没有空腹）；凝血时间不够；脂肪血（营养过剩）14粪便、棉拭子和O/P液样品的采集泄殖腔拭子的采集：将棉拭

7、子插入泄殖腔约1.5~2cm,旋转后沾上粪便。咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋转将拭子拔出，将棉拭子放入缓冲液内。O/P液是从动物食道/咽喉刮取的黏膜样品，用特制的食道探环刮取黏膜，放入样品保存液中。15水泡液及水泡皮的采集用75%酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理盐水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的PBS缓冲液中；然后用剪刀将水泡皮剪下，放入含抗生素的PBS缓冲液中。163、采样的准确性和时效性代表性：应该考虑到整个监测区域的地理分布，选取有代表性的点。如动物品种

8、分布、日龄、饲养密度、地势特点、交通特点、动物迁徙习性等因素。如禽流感采样时，疫区交接处，野鸟迁徙途径，水禽家禽混合饲养处等。时效性：如抗体监测，免疫后14天左右才可以采集；监测病原时，注意排毒时间和病原的易嗜细胞和组织，在监测时要根据不同时期，采集不同部位的组织进行检测。如