动物疫病实验室检验采样方法

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1、动物疫病实验室检验采样方法NY/T541—2002前言 动物病料样品的采集是动物疾病诊断、流行病学调查或免疫监测所不可缺少的重要步骤，在各国的兽医学标准中都把这一部分纳入第一重要内容，广泛应用于动物疾病流行病学调查、动物检疫和科研教学。世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英)，OfficeIntentionaldesEpizootic(法)，OIE]推荐的诊断方法中，也将该部分内容列为第一部分内容。本标准是依据世界动物卫生组织(OIE)《诊断试验和疫苗标准手册》(2000版)(ManualofStandardsforDiagnosticT

2、estsandVaccines，2000)第1·1.1章"SamplingMethods"的技术要求编写的。本标准与该章的非原则性差异在于:——本标准结合本国实践经验对操作程序和条件作了更具体的陈述和规定；——本标准根据GB/T1.1-2000的规定和汉语习惯将该章的陈述性文本改为规范性标准文件。本标准的附录A为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:农业部动物检疫所。本标准主要起草人:吴延功、杜元钊、朱万光、刘佩兰、仰惠芬。1范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫

3、学等实验室检验所需样品的采集。2样品采集的一般原则和采集前的准备2.1样品采集所遵循的一般原则2.1.1凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。2.1.2采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。采样时应小心谨慎，以免对动物产生不必要的剌激或损害和对采样者构成威胁。在无法估计病因时，可进行全面的采集。检查病变与采集

4、病料应统筹考虑。2.1.3内脏病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。2.1.4血液样品在采集前一般禁食8h。2.1.5应做好人身防护，严防人畜共患病感染。2.1.6应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。2.2使用器械的消毒刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用时进行火焰消毒。器皿(玻制、陶制等)经103kPa高压30min，或经160℃干烤2h灭菌；或放于0.5%～1%的碳酸氢钠(NaHCO3)水中煮沸10min～15min，水洗后，再用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用。注射器和针头放于清洁水中煮沸30min。一般要求

5、使用"一次性"针头和注射器。采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。采过病料的用具应先消毒后清洗。检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2mol/L的氢氧化纳(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。3样品的采集3.1血液3.1.1采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可用尖刀划破趾垫50.5cm深或剪断尾尖部采血。啮齿类动物可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛采血；兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采血。禽类通常选择翅静脉采血，也可通过心脏采血。3.1.2采

6、血方法对动物采血部位的皮肤先剃毛(拔毛)，75%的酒精消毒，待干燥后采血，采血可用针管、针头、真空管或用三棱针穿刺，将血液滴到开口的试管内。禽类等的少量血清样品的采集，可用塑料管采集。用针头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm～4mm的塑料管内，将一端封口。3.1.3采血种类3.1.3.1全血样品进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，通常用全血样品，样品中加抗凝剂。抗凝剂可用0.1%肝素、阿氏液(见第A.l章)(阿氏液为红细胞保存液，使用时，以1份血液加2份阿氏液)，或枸橼酸钠(3.8%～4%的枸橼酸钠0.1mL，可抗1mL血液)。采血时应直接将血液滴入抗凝剂中，并立即连续摇动，

7、充分混合。也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，震荡脱纤维蛋白。3.1.3.2血清样品进行血清学试验通常用血清样品。用作血清样品的血液中不加抗凝剂，血液在室温下静置2h～4h(防止曝晒)，待血液凝固，有血清析出时，用无菌剥离针剥离血凝块，然后置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出后取出血清，必要时经低速离心分离出血清。在不影响检验要求原则下可因需要加入适宜的防腐剂。做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂(如硼酸、硫柳汞等)。若需长时间保存，则将血清置2