动物疫病实验室检验采样方法

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1、动物疫病实验室检验采样方法(NY/T541-2002)1　范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。  本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。2　样品采集的一般原则和采集前的准备2.1　样品采集所遵循的一般原则2.1.1　凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。2.1.2　采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物

2、、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。采样时应／jxjD,．谨慎，以免对动物产生不必要的刺激或损害和对采样者构成威胁。在无法估计病因时，可进行全面的采集。检查病变与采集病料应统筹考虑。2.1.3　内肌病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。2.1.4　血液样品在采集前一般禁食8h。2.1.5　应做好人身防护，严防人畜共患病感染。2.1.6　应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。2.2　使用器械的消毒刀

3、、剪、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用时进行火焰消毒。器皿(玻制、陶制等)经103kPa高压30min，或经160C干烤2h灭菌；或放于0．5％一1％的碳酸氢钠(NaHCr~)水中煮沸10min 15rain，水洗后，再用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用。注射器和针头放于清洁水中煮沸30rain。一般要求使用“一次性”针头和注射器。采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。采过病料的用具应先消毒后清洗。检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2mol／L的氢氧化钠

4、(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。3　样品的采集3.1　血液3.1.1　采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可用尖刀划破趾垫0.5cm深或剪断尾尖部采血。啮齿类动物可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛采血；兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采血。禽类通常选择翅静脉采血，也可通过心脏采血。3.1.2　采血方法对动物采血部位的皮肤先剃毛(拔毛)，75％的酒精消毒，待干燥后采血，采血可用针管、针头、真空管或用三棱针穿

5、刺，将血液滴到开口的试管内。禽类等的少量血清样品的采集，可用塑料管采集。用针头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm～4mm的塑料管内，将一端封口。3.1.3　采血种类3.1.3.1　全血样品进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，通常用全血样品，样品中加抗凝剂。抗凝剂可用0.1％肝素、阿氏液(见第A.1章)(阿氏液为红细胞保存液，使用时，以1份血液加2份阿氏液)，或枸橼酸钠(3.8％一4％的枸橼酸钠0.1mL，可抗1mL血液)。采血时应直接将血液滴人抗凝剂中，并立即连续摇动，充分混合。也可将血液放人装有玻璃珠的灭

6、菌瓶内，震荡脱纤维蛋白。3.1.3.2　血清样品进行血清学试验通常用血清样品。用作血清样品的血液中不加抗凝剂，血液在室温下静置2h~4h(防止曝晒)，待血液凝固，有血清析出时，用无菌剥离针剥离血凝块，然后置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出后取出血清，必要时经低速离心分离出血清。在不影响检验要求原则下可因需要加入适宜的防腐剂。做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂(如硼酸、硫柳汞等)。若需长时间保存，则将血清置20C以下保存，但要尽量防止或减少反复冻融。样品容器上贴详细标签。3.1.3.3　血浆的采集采血试管内先加上抗凝

7、剂(每10mL血加柠檬酸钠0．04g一0．05g)，血液采完后，将试管颠倒几次，使血液与抗凝剂充分混合，然后静止，待细胞下沉后，上层即为血浆。3.2　一般组织3.2.1　采样方法用常规解剖器械剥离死亡动物的皮肤，体腔用消毒的器械剥开，所需病料按无菌操作方法从新鲜尸体中采集。剖开腹腔后，注意不要损坏肠道。作病原分离用：进行细菌、病毒、原虫等病原分离所用组织块的采集，可用一套新消毒的器械切取所需器官的组织块，每个组织块应单独放在已消毒的容器内，容器壁上注明日期、组织或动物名称。注意防止组织间相互污染。3.2.2　采样种类

8、3.2.2.1　病原分离样品的采集用于微生物学检验的病料应新鲜，尽可能的减少污染。用于细菌分离的样品的采集，首先以烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂耳伸人孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。3.2.2.2　组织病理学检查样品的采集采集包括病灶及临近正常组织的组织块，立即放人10倍于组织块的10％福尔