《长期毒性试验》PPT课件

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长期毒性试验目的意义基本内容和要求有关问题Mechanic?Innovative? 目的意义毒性剂量Toxicdosage安全范围Safetymargin毒性反应Toxicreaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性毒性反应靶器官Targetorgan毒性反应是否可逆Reversibility ProceduresAnimalsHousingTestarticleRouteDosageandgroupAdministrationdurationObservation Procedures1---animalsrodentnon-rodentratbeagledogmousemongreldogmonkey 基本内容和要求----动物二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬),必要时用猴动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格证号大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20％。3个月以上可选5-6周龄大鼠Beagle犬4-12月龄♂♀各半 Procedures2----housingDiet,T,humidity,light,ventilationRat:≤5/cageorseparated，acclimation≥1wDog:TBtest,anthelminticacclimation:1-2w/1m Procedures3----testarticletestarticle/solvent/excipientname,batchNo.,source,specification,purity,preservecondition,etcsamequalitycriterion 基本内容和要求----给药途径与临床给药途径一致混入饲料或饮水中灌服时保证受试药分布均匀在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定计量准确临床iv时,大鼠给药周期＞1月，可用ip代替，im或sc应变换注射部位必要时改变给药途径 基本内容和要求----剂量及分组三个给药组,单位:mg(ml,IU)/kg或/m2以不等浓度等容量给药低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应中剂量组--产生轻微或中等度毒性反应高剂量组--产生明显或严重的毒性反应，或个别动物死亡空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加正常对照组 基本内容和要求----剂量及分组<3月，大鼠♂♀各20只/组≥3月，大鼠♂♀各30只/组大动物6-8只/组（♂♀各半）限度试验：如小鼠ig急毒>5g/kg,iv>2g/kg仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应,可只做一个>50ACD(犬用30ACD)的剂量组 Procedures6---ad.durationTab.　Corresponddurationofclinicalad.withanimalad.clinicalad.duration　　　animalad.duration1～3d14d1w1m4w3m≥1m6mduration≥3mad.6dayweekly(mon.tosat.) Procedures7----ObservationsClinicalExaminationsrodentnon-rodentsignsofillhealth+pupil,Tbehavioralchangesbreath,sialosisreactiontotreatmentvomitingDeadormoribundanimal:necropsywithin1h Procedures7----ObservationsHematologyRedbloodcellcount(RBC)Hemoglobin(Hb)Erythrocyteindices(MCV,MCH,MCHC)Hematocrit(Hct)PlatletcountWhitebloodcellcountandpercentdifferentialCoagulationtime(CT)Reticulocytecount,Bonemarrowsmear Procedures7----ObservationsClinicalchemistryAlanineaminotransferase(ALT)　（丙）Aspartateaminotransferase(AST)（草）Alkalinephosphatase(ALP)Totalbilirubin（Tbill）Bloodureanitrogen（BUN）Creatinine（Cr）Totalprotein（TP）Albumin（Alb）Glucose(Glu)Totalcholesterol（Tch） Procedures7----ObservationsUrinalysisColorandappearancepHglucoseketonesurobilinogenbloodspecificgravitynitriteproteinbilirubinWBCmicroscopyofcentrifugeddeposit Procedures7----ObservationsPathologyOrganweightassessment:heartliverthyroidlobesandspleenlungparathyroidskidneysbrain(lobesweighedpituitaryadrenalstogether)ovariestestescalculateorganweightsrelativetobodyweight,pairedorgansweightogether Procedures7----ObservationsPathologyHistopathologicalexamination:heartliverspleenlungkidneybrainadrenalspancreasstomachduodenumjejunumileumcoloncecum（盲）pituitarythymusspinalcordprostatetestesuterusovariesopticnerveinjectionsiteboneandmarrow(sternum)urinarybladderlymphnodes(mesenteric)thyroidlobes(andparathyroids) Procedures7----ObservationsPathologytissues(c+hembeddingdead+sectioningtarget)stainingexamination 基本内容和要求----检测指标心电图Ⅱ导联大动物长期毒性必须做主要观察指标：心率、P波电压、P-R间期、R波电压、QRS时间、ST段、T波电压和Q-T间期 Procedures7----ObservationsRecoveryObservation:1/3～1/2animal,2～4wLatetoxicreactionandreversibilityItems:sameastreatmentperiodNotreversible? Procedures7----ObservationsFrequencyoflab.investigationsrat<=3mrat>3mNon-rodentlastad.interimtwicepretreatmentrecoveryendlastad.onceevery1-1.5mrecoveryendlastad.recoveryend 基本内容和要求----资料整理首页写明:负责者的姓名、职称、实验开始及结束日期、实验承担单位、研究室负责人和资料保存单位试验指导者、课题负责人、病理学检查、血液生化指标测定、血液学指标测定及给药观察者第二页书写试验摘要第三页开始写正文、引言、材料与方法、结果合理的统计图、表有差异的指标应进行统计处理应客观地描述尸检及组织病理学检查结果对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量--时关系 ProblemsPretestDosageAnimal&HousingRouteDurationObservationParametersDatahandlingArchives Problems1---pretestWhatdependon?Overseaspre-clinical/clinicaldataAcutetoxicity,pharmacodynamicsandpharmacokineticsorintendedclinicaldoseHowlong?2w--1mRecombinantarticle:antibody? Problems2---dosageLD50MTDMBSACD3m6m1/10110Cmax50～10030～501/501/35Cmax30～5015～251/1001/10Cmax10～205～10halffordogandmonkey 有关问题2---剂量表常用动物等效剂量折算表━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━项目人犬猴兔豚鼠大鼠小鼠────────────────────────────────成年时体重(kg)701241.50.40.20.02换算常数(k)12.311.611.81210.510.510每公斤用药量折算(mg/kg)11.52.23.14.35.411.0体表面积折算等效剂量比10.320.160.070.0310.0180.0026━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 有关问题2---剂量由于溶解度(注射剂)关系,剂量无法再增加时,应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药一些腔道用药、血浆代用品的高剂量也应采用类似方法防止犬与大鼠剂量倒置必要时增加阳性对照组 Problems3---animalrodentnon-rodentWistarBeagledog(4-12m)SpragueDewleymonkey(<3y)6-8wbodyweightCV<20%Duration≥6m,naturaldeath(rat:1y-15%,1.5y-50%,2y-70-80%) 有关问题3---饲养管理主要因素动物类别小鼠、大鼠豚鼠、家兔犬温度(℃)20-2618-2818-28湿度40-60%40-60%40-60%换气次数10-15次/h10-15次/h10-15次/h气流速度13-18cm/s13-18cm/s13-18cm/s压力正压正压负压洁净度100000级100000级落下细菌＜＝3个/皿＜＝3个/皿照明150-300Lux150-300Lux噪声＜60db＜60db臭气氨浓度＜20ppm氨浓度＜20ppm 有关问题3---分组♂♀分别随机分组把体重过大、过小去掉，以免差异过大，开始实验时大鼠体重不应超过±20％大动物则根据给药前生理生化指标测定把指标过高或过低的动物去掉 有关问题4---给药途径与临床给药途径一致注射剂要考虑溶液的pH、刺激性及渗透压等，以免造成注射局部损伤或坏死大鼠iv>1月，长毒可改用ip注射，im或sc可采用四肢多点轮流注射临床有用药后加上照光(血卟啉类＋激光)或X-照射(CM-Na光敏剂＋γ-射线)，动物上只给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光后的毒性低 有关问题4---给药途径特殊情况下可改变给药途径胆道给药溶解胆结石肿瘤局部注射给药(肝瘤注射)舌下给药腔道给药(阴道、关节腔注射、硬膜或脊髓腔给药、滴耳药)内病外治、穴位给药(肝脐贴药或其他穴位给药,)艾炙加中药药酒治病、中药加烤电雾化吸入抗肝癌导向药物动脉注射Vd可改用iv代替，反之则否 Problems5,6---observationsWesternChineseRecombinant3～4times≥2timesantibody≤6mToxicreaction:properties,degree,dose-toxicityrelationship,initiatingtime，peaktime,lastedtime,latereactiontoxicity,accumulatingtoxi-city,toleranceeverydayor6daysaweek? Problems7---parametersPossibleToxicReactionspharmaco-chemicalpretestingpublishedlogicaleffctsstructureresultsdata Problems7---parametersOverloadingReticulocytecountASTALPBUNAlb Problems7---parametersTissue:freeoffathalfrationed：nochanges(-)0,suspected（±）0.5，mild（＋）１，median（++）２，severe（+++)３Localinflammation,WBCinfiltration,localbleeding,haemostasis,suspectedcelldegenerationself-infected,sacrificeinduced 有关问题7---测试方法测试方法必须公认，有文献依据新的测试方法要经同行专家认可对于某一指标的不同测试方法，应交待清楚选择的理由方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确 有关问题7---测试次数能反映动态变化一般行为活动宜每天观察记录食量宜每天称重大鼠体重宜每周一次，按体重给药其它生理指标每半月至１月一次大动物心电图用II导联，至少给药前、给药期间、给药后及停药结束各测一次发现有阳性指标应加大观察密度 有关问题7---测试次数大动物生化检测，给药前2次、给药期间１-２次，停药时及实验结束各1次，这样就可看出动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行组间比较，也可进行自身对照大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给药期可测一次，主要是因为生化指标较多，采血量大 有关问题7---停药观察时间的长短取决于给药周期，一般可1/3-1/2给药周期，或2-6周了解毒性反应在停药后能否恢复观察有否迟发性毒性反应，特别是神经系统毒性反应 Problems8---datahandlingRationdata:x±s,internationalunitvscontrolanddosedgroup,vsd0Statistics:ttestorFtest，RiditanalysisP<0.05：significance? 有关问题9---资料整理rawdata,documentation,records,protocol(andamendmentsthereto),specimens,reservesamples,controlarticle,finalreport(signed)原始资料应保存完好，我国规定原始资料至少保存至生产后２年 InnovativeAnimalDosageParametersRouteDatahandling 确实做好预试pretest周密设计剂量dosage精心饲养动物housing细心观察反应observation认真测定指标examination实事求是总结conclusion SummaryImportance5objectives(DOSTR)9problemsStandard&innovative