临床微生物检验流程

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1、临床微生物检验流程微生物实验室工作流程待检样本•1.标本采集涂片染色血清学检测•2.镜检DNA探针单克隆抗体•3.分离培养接种培养阳性•4.细菌鉴定涂片染色•5.药敏试验阴性IDAST报告报告2标本采集标本标本收集病理尿/痰尿道感染/呼吸道感染大便肠食物中毒，腹泻生殖道标本拭子阴道炎,宫颈炎,前列腺炎,尿道炎,性病…脓拭子或注射器脓肿,腹腔液,皮肤感染3标本运送马上把标本接种或使用运送培养基为什么?-细菌是生物!-有必要:•保持它们生存•防止它们增长为什么?-实验室与采标本的地点距离很远:标本是在家里采，或在病人床边采4标本运送如果不能马上接种培养基,在运送过程中把标本

2、储存:运送培养基能避免标本干燥4℃37℃和/或运送培养基尿，大便生殖道标本,CSF,血,脓?不需要细菌增生可能是脆弱的细菌可能是厌氧菌5样本运送－运送培养基细菌•Amies培养基•Stuart’s培养基•Cary－Blair培养基•运送拭子：Amies琼脂凝胶、液体运送拭子病毒•M4培养基（制成）•M4RT培养基（制成）6镜检1-直接检查把一滴放在玻片与盖片之间:镜片x40,dry•细菌的存在和数目•形态和分类特点•动力•细胞学：观察细胞如：白细胞（感染的指使）7镜检2–革兰氏染色细菌学最常用的染色方法用来给细菌分类革兰氏+紫蓝色革兰氏-粉红色8其他染色的方法Color

3、ationwithmethyleneblue亚甲基蓝染色用于白细胞内的细菌染色eg:淋病双球菌Giemsa吉母萨染色用于血液或细胞内的细菌染色Ziehl-Neelsen齐-奈染色用于分支杆菌染色Acridineorange吖啶橙染色荧光染色用于细菌感染量少的标本9镜检－染液染色试剂•革兰氏染色液套装R40080250ml*4•抗酸染液套装－分枝杆菌（结核）R40112250ml*6•荧光染液－真菌、微孢子虫等BactiDrop染色剂染色质控片•抗酸染色、革兰氏染色、隐孢子虫等10培养如果要使细菌生长,必须满足细菌的需要:•营养琼脂•正确的空气环境•正确的温度11分离培

4、养—培养基-选择正确的培养基:•视乎要检测的细菌•视乎标本?显色培养基?基础培养基?增菌培养基?选择性培养基?12分离培养—培养基•不同种类的培养基•基础培养基:含最少的营养元素•增菌培养基:基础培养基+血,生长因子...•选择性培养基:加有抗生素或其他•显色培养基:加有导致产生有颜色菌落的显色底物培养基可以同时是选择性和增菌,或选择性和显色...13培养•在固体培养基的生长:把细菌放在营养基上会使细菌增长和形成肉眼可见的组:菌落=1百万细菌=20代用来分离14培养－Oxoid干粉培养基•CM：基础干粉，含有丰富的碳源、氮源、生长因子、选择性抑制因子，显色剂•SR：添加剂

5、，通常包装10小瓶/盒，每瓶通常可配制500ml或225ml添加的培养基，成分通常是抗生素和热敏感的营养成分15培养－Oxoid制成培养基医院常用品项：•滋养性：营养琼脂、血平板、巧克力平板•肠道菌：麦康凯、中国蓝玫红酸、伊红美蓝、SS平板•分隔平板：血琼脂/麦康凯琼脂、血琼脂/中国蓝玫红酸琼脂等•真菌：沙保氏葡萄糖•显色：念珠菌显色培养基、尿路感染显色培养基16培养•在液体培养基的生长:细菌在营养肉汤里会增生,令培养基变得浑浊(可以用肉眼观察)用肉汤来培养是不能区别多种细菌生长还是一种细菌生长用来增菌例:脑心肉汤,胰酶大豆肉汤...17分离培养—培养温度•选择正确的温度

6、:-细菌:37℃-霉菌:30℃培养箱?30℃37℃19分离培养—培养条件不同的呼吸种类123420分离培养—培养条件1-绝对需氧菌需要有氧气它们是利用氧气来产生能量:呼吸（一种氧化的代谢作用）例：假单胞菌，分支杆菌2-兼性厌氧菌可在有空气或没有空气下生长，但是主要的能量是靠发酵产生例：肠道杆菌21分离培养—培养条件3-绝对厌氧菌只会在没有空气的情况生长。氧气对这些细菌是有毒的。所有的能量是从发酵而来（发酵代谢）例:梭菌属细菌4-微需氧细菌较喜欢在少氧气的环境下生长例：弯曲菌，支原体5-嗜二氧化碳的细菌有些细菌较喜欢多二氧化碳的环境生长例：淋病氏菌22分离培养—培养条件•选择

7、适当的空气环境:-需氧菌无需产生器-兼性需氧菌-微需氧菌微需氧菌产生器-厌氧菌厌氧产生器CO产生器-嗜二氧化碳的细菌223分离培养—培养时间•细菌生长过程细菌浓度3241时间24Hrs48Hrs24分离培养目的：获得纯培养后进一步鉴定1.无菌部位的标本（血液，脑脊液，胸腹水，关节液，尿液）：直接接种在液体/固体培养基。2.正常菌群存在部位的标本（各种鼻咽，尿道试子，粪便）：接种至选择或鉴别培养基。培养条件：37℃16-20小时培养，少数需3-4周（如布鲁菌，分枝杆菌）优点：比直接涂片镜检的阳性率高。25细菌鉴定需用