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1、·124·中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2003;11(2):124-127文章编号(ArticleID):1009-2137(2003)02-0124-04·论著·TNF2α刺激的人脐静脉内皮细胞组织因子表达及其分子机制宋善俊,王林林,魏文宁华中科技大学同济医学院血液病研究所,武汉430022摘要 为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在肿瘤坏死因子(TNF2α)刺激下组织因子(TF)的表达及其分子机制,用流式细胞术检测HUVEC膜表面TF蛋白的表达,用RT2PCR方法检
2、测TFmRNA的表达和用Western印迹方法检测HUVEC核蛋白中核因子κB(NF2κB)。结果发现,TNF2α能刺激HUVEC细胞膜表面TF表达增加,其增加与TFmRNA合成增加具有高度一致性,且TF表达的增高滞后于mRNA升高数小时之后;TF表达增加的同时伴有核蛋白(κB)显著的活化。结论:TNF2α刺激HUVEC后,迅速活化NF2κB,启动TF的转录,TFmRNA表达增加,TF蛋白合成增加,导致TF在HUVEC膜表面表达增加,激活凝血途径。关键词 脐静脉内皮细胞;肿瘤坏死因子2α;组织因子;核因子κB中图分类号
3、 R554;R730123113文献标识码 ATissueFactorExpressioninHumanUmbilicalVienEndothelialCellsStimulatedbyTNF2αandItsMolecularMechanismSONGShan2Jun,WANGLin2Lin,WEIWen2NingInstituteofHematology,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,ChinaAbst
4、ractTheobjectiveofthisstudywastoexploretissuefactor(TF)expressioninducedbyTNF2αinculturedhumanumbilicalvienendothelialcells(HUVEC)anditsmolecularmechanism.TFexpressiononthesurfaceofHUVEC,TFmRNAandnuclearfactorκB(NF2κB)inHUVECweredetectedbyflowcytometry,RT2PCRandWe
5、sternblotrespectively.TheresultsshowedthatTNF2αcouldenhanceTFexpressiononthesurfaceofHUVEC,theTFexpressionincreasewashighlyconsisitentwiththeincreasedsynthesisofTFmRNA,andtheincreaseofTFexpressionwaslatelyappearedforseveralhours.ItwasalsofoundactivationofNFκBatthe
6、timeTFmRNAincrease.Inconclusion,NF2κBcouldbeactivatedpromptlyafterHUVECincubatedwithTNF2α,thenitwasboundtoTFpromotortostarttheTFtranscription,TFmRNAexpressionwasupregulated,thatleadedtotheincreaseofTFexpressionontheHUVECsurfaceandactivatedthecoagulationcascade.Key
7、wordsumibilicalveinendothelialcell;tumornecrosisfactor2α;tissuefactor;nuclearfactorκBJExpHematol2003;11(2):124-127组织因子(tissuefactor,TF)又称凝血因子Ⅲ,是外材料与方法源性凝血系统的始动因子,是机体内活性最强的促凝物质之一。它是分子量为47kD的含糖基跨膜蛋材料白,固定表达在平滑肌细胞、成纤维细胞等细胞表胶原酶溶液:100mg胶原酶溶于100mlD2Hank′s[1]面,但完整的血管内皮细胞表
8、面并不表达组织因液,pH7.2-7.4,滤膜过滤除菌,分装于-20℃冰子。在动脉粥样硬化等病态条件下,内皮细胞结构箱保存,用时于37℃水浴解冻。内皮细胞生长支持和(或)功能出现异常而表达TF。血栓形成的机制物(ECGS):30mg溶于30ml无血清RPMI1640培极为复杂,涉及血管壁、血小板、凝血及纤
