创新实验 陈刚

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1、黄粉虫热休克蛋白基因的克隆与表达研究陈刚王锐刘鉴稷王灵团队成员:答辩提纲项目申请理由项目创新性项目实施方案项目研究计划项目申请理由热休克蛋白（Hsps）是细胞或生物体遭受亚致死高温短暂协迫时，新合成的或含量增加的一类蛋白质。HSPs在生物体内具有重要的生物学功能，如：充当分子伴侣，使生物获得耐热性和参与调控细胞骨架动力学等。同时，HSPs的应用研究也早已引起人们的广泛关注，如：作为治疗肿瘤的新型疫苗和靶标分子，作为遗传育种、法医鉴定、监测环境污染等的生物标记，用于探索细胞器起源、研究物种进化等。目前关于昆虫热休克蛋白的报道非

2、常有限，黄粉虫热休克蛋白的研究更是未见报道。项目申请理由黄粉虫俗称面包虫，隶属鞘翅目、拟步行虫科、粉虫甲属，一生历经卵、幼虫、蛹、成虫4个生长发育阶段。→↓←↑黄粉虫是我国传统的饲用和食用昆虫，长期以来广泛用作畜禽和其它一些特种经济动物的饲料（或饵料），现已广泛应用于农业、畜牧业、食品和医疗保健方面，具有极高的开发利用价值和广阔的市场前景。畜牧养猪食用做菜食用油畜牧养鸡四川农业大学森林保护学实验室经过多年的努力，目前已选育出黑色型和黄色型2个黄粉虫新品系。黄色型幼虫黑色型幼虫黑色型蛹黄色型蛹黑色型成虫黄色型成虫项目申请理由前

3、期研究表明，这2种色型黄粉虫在生长发育性状、繁殖能力、抗逆性、营养价值及主要逆境协迫相关同工酶等方面均存在较大差异。但这2种色型黄粉虫的HSP基因及其表达规律是否也存在差异，它们表现出的抗逆性差异又是否与其HSP基因及其表达有关，至今均未见报道。为给黄粉虫抗性育种及其饲养管理提供科学的理论依据，有必要对黄、黑2种色型黄粉虫的热休克蛋白基因及其表达规律进行研究。项目创新性1首次对黄粉虫HSP基因的克隆进行研究2首次对黄粉虫不同发育阶段HSP基因的表达进行初步探索3首次对两种色型黄粉虫HSP基因及其表达的差异进行研究项目实施方案

4、两种色型黄粉虫HSP基因克隆与序列分析HSP扩增引物设计与合成两种色型黄粉虫总RNA抽提两种色型黄粉虫的HSP基因克隆HSP基因序列分析mRNA反转录合成第一链cDNA扩增目的片段回收与纯化目的片段与载体的连接转化感受态细胞PCR筛选阳性克隆1两种色型黄粉虫HSP基因的克隆与序列分析图一2两种色型黄粉虫的HSP基因表达研究两种色型黄粉虫热休克蛋白基因表达规律研究卵期热休克蛋白基因表达规律研究幼虫期热休克蛋白基因表达规律研究蛹期热休克蛋白基因表达规律研究成虫期热休克蛋白基因表达规律研究试虫热处理总RNA提取mRNA反转录合成第

5、一链引物设计模板定量RT-PCR图二项目研究计划2010年10月—2011年10月：完成2种色型黄粉虫的饲养及其热休克蛋白基因克隆。2011年10月—2012年4月：完成2种色型黄粉虫热休克蛋白基因表达规律的研究；同时进行试验数据的分析处理，并撰写学术论文（1-2篇）和总结报告。谢谢！