[精品]细菌常见的生化鉴定

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1、细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。1）了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。2）了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。3）了解细菌在不同培养基的不同生长现彖及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。二、实验原理。各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用牛理牛化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴別细菌的种属，称Z为细菌的生理生化反应。1.糖（醇）类发酵试验原理：不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同,产生的代谢产物也

2、不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂浪甲酚紫，PH5.2黄色-PH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中冇无气泡来证明。培养基的制备：操作：编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。接种：取匍萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种人肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。将已接种好的培养基置32°C温箱中培养24ho2.甲基红试验（M.R试验）原理：甲基红试验，pH4.4红色〜pH6.2黄色，是用来

3、检测由匍萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产牛「内酮酸，内酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将冇冇机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酗酸等，使pH升至大约6。甲基红（MR）试剂：甲基红：0.04g95%的乙醇：60ml蒸饰水：40ml,先将甲基红溶于95%的乙醇屮再加入蒸镉水即可。试剂的制备：葡萄糖蛋白月东水培养基：在100ml邓亨氏蛋白JI东水中加入lg葡萄糖即可。步骤：将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白腺水培养基中，32°C培养24h,加叩基红

4、指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。3・Voges-Proskauer试验（伏■普试验，V.P.试验）原理：伏-普试验是用來测定某些细菌利用葡萄糖产牛非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成内酮酸，再将内酮酸缩介脱竣成乙酰屮基屮醇。乙酰卬基「卩醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基屮所含的弧基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。培养基的制备：V—P试剂：在100ml蒸镭水中溶解40gNaOH,再加入0.3g肌肝（VP甲液）即成步骤：将被检菌接种到葡萄糖蛋白月东水中，32°C培养24h,取出，加入40%KOH7滴

5、，然后再加入等量的5%氐荼酚溶液，用力振荡，再放入37°C温箱中保温30min,以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏一普反应阳性。4.靛基质（眄呀）试验原理：某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白腺小的色氨酸，产生靛棊质，靛基质与对二卬基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质培养基的制备：II引味试剂：对二甲基氨基苯甲醛：2g；95%的乙醇:190ml；浓盐酸：40mlo步骤：将被检菌接种到胰蛋白月东水培养基中，32°C培养24h后，滴加数滴吩味试剂于培养物液面，轻轻摇动，观察结果。岀现红色者为阳性，岀现黄色者为阴性。5.硫化氢试验原理：某些细菌能

6、分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。试剂的制备：酷酸铅或柠檬酸铁氨培养基：步骤：将人肠杆菌和变形杆菌以接种针穿刺接种到醋酸铅或柠檬酸铁氨培养基中，32°C培养24h,观察结果，若有黑色岀现者为阳性。6.明胶液化实验原理：明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产住一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋口质，而使明胶液化，其至在4度仍能保持液化状态。试剂的制备：明胶培养慕：明胶12-15g；普通肉汤：100ml。将明胶加入肉汤中，水浴加热溶解，调p

7、H7.2,分装试管，115°C高压灭菌lOmin,取出后迅速冷却，使其凝固。步骤：取大肠杆菌和枯草杆菌的纯培养物少许，以接种针分别穿刺接种到营养明胶培养基屮，置32°C培养24小时。故观察结果时，应将明胶培养基轻轻放入4°C冰箱3（）min,此时明胶乂凝固。若放宜于冰箱30min仍不凝固者，说明明胶被试验细菌液化，是为阳性。柠檬酸盐利用试验原理：有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐示产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基屮的溟麝香草酚蓝指示剂pH6.0（黄）〜7.6（蓝），由绿色变为深蓝色。试剂的制备

8、：柠檬酸盐培养基：步骤：取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，32°C培养24h后，观察结果。培