Rapd的研究进展【文献综述】

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1、毕业论文文献综述生物技术Rapd的研究进展摘要：RAPD技术分子标志技术中的一种，是一项多态检测新技术。它利用PCR反应将引物中的碱基与基因组DNA中互补顺序配对，从而产生多态性DNA普带。RAPD应用非常广泛，可以用于中药生物的鉴定、植物育种等方面[1]。本文着重从RAPD的原理，以及它的优缺点，RAPD在各方面的应用来阐述。关键字：分子标志；RAPD技术；应用；DNA分子标记主要有RFLP(限制性片段长度多态性)、RAPD(随机扩增多态性DNA)、AFLP(扩增片段长度多态性)、STS(序列标记位点)、SSR或SSLP(简单重复序列)和DNA指纹技术等几种.其中RA

2、PD技术是1990年由williams和美国加利佛尼亚生物研究所科学家Welsh几乎同时发展起来的一种探寻物种多态性的分子生物学方法[2]。该技术具有快速、准确等优点，因此一开始受到生物学家的高度重视。RAPD是运用PCR原理,以随机设计的寡核苷酸引物扩增总DNA中的一些片段的技术，发展至今，短短几年时间，被用于品种鉴定、分类研究、系谱的分析，遗传图谱的构建、突变体检测、基因定位等遗传、育种领域等其他诸多领域[3]。鉴于Rapd技术的简便、迅速，适用范围广，在越来越多的研究中发挥重要的作用，其应用前景非常广阔。1.RAPD技术1.1原理以样品DNA为模板，以一个人工合成

3、的随机寡核营酸序列（通常10个碱基对)为引物，通过对所研究的基因组DNA进行PCR扩增反应，电泳分离，然后通过琼脂糖凝胶电泳分离后，经EB染色后紫外凝胶成像系统来检测其扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增产物DNA片段的多态性即反映了基因组相应区域的DNA多态性[4]。RAPD是用短的随机序列DNA作为引物对基因组DNA进行PCR扩增而产生的多态性DNA片段，所用的一系列引物DNA序列各不相同，但对于任一特定的引物，它同基因组DNA序列有其特定的结合位点[5]。一个单引物与基因组DNA混合，在耐热DNA聚合酶和合适的缓冲系统存在下进行经典的PCR热循环。模板在92-94

4、℃变性解链后，在足够低的温度(35-370C)下，根据碱基互补原则，单个引物退火到基因组DNA模板两条反向链的不同位置上，在有足够的DNA聚合酶活性条件下，dNTP从引物的3’端掺入，接上与模板DNA互补的各种单核普酸，延伸到一定长度得到一段新的互补DNA链。在基因组上，某一引物可能会与单链DNA的多个位点互补结合，但只有这些引物的位置是在彼此可扩增的距离内(引物间距为200-2000bp)，一组不连续的分子量为200-2000bp的DNA片段就会通过PCR产生。因此，如果基因组在这些区域发生DNA片段插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点分布发生相应变化，而使

5、PCR产物增加、缺少或发生分子量的改变而产生多态。通过PCR产物的检测即可检测出基因组DNA在这些区域的多态性。由于进行RAPD分析时可用引物量很大，虽然对每一个引物而言其检测基因DNA多态性的区域是有限的，但是利用一系列引物则可使检测区域几乎覆盖整个基因组，因此，RAPD可以对整个基因组DNA进行多态性检测。1.2优缺点优点：材料：取材广泛，不受季节和组织器官发育时期的限制对时间特异性、组织特异性要求不高，不随组织或发育段而异，从植物体任何部位提取的DNA均可用于分析[6]。模板：1.RAPD分析只需少量模板。2.可供RAPD检测的DVA标记位点数量多。对模板的质量要

6、求不是很高。4.RAPD标记可以覆盖整个基因组，包括编码区和非编码区，可以反映整个基因组的变化。引物：1.没有严格的种属界限，同一套引物可用于任何一种植物的研究，并且这些引物对任何基因组研究是通用的，具有广泛性和通用性，不需要建立文库或筛选探针。2.不需要预先了解目的。基因和相应的序列，而常规PCR必须通过已知程序设计特定的引物3.引物。具有普遍的适应性，适用于自动化操作分析。反应条件：(1)RAPD退火温度低，一方面保证引物与模板的。稳定配对，提供更多的检测位点2.分析自动化，无需使用同位素或其它放射性标记，试验过程中也不需要进行Southern转移和分子杂交等步骤。

7、生长环境：不受环境影响，其变异源于等位基因DNA序列的差异，排除了由于环境差异造成的表型差异[7]。基因定位与图谱的构建：RAPD分子标记具有更大的随意性，它在基因定位上可以快速定向寻找与所定位基因相连锁的DNA标记[8]。RAPD技术可直接对基因组进行连锁标记作图，引物设计是随机的，不需要预先知道特异位点的信息，这就避开了RFLP和重复序列基因组作图的预备性工作。缺点：1.稳定性较差，PCR反应对反应条件极为敏感，反应条件的细微变化都可能影响到试验结果的重复性，因此要求严格的反应条件才具有重复性。2.分子标一记技术不能区分显性纯合基因型