微生物限度检查抗真菌软膏剂方法的研究

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1、微生物限度检查抗真菌软膏剂方法的研究目的：寻找一种能客观地反映抗真菌软膏剂中微牛物污染状况的微牛物限度检查方法。方法：采用3种不同方法对酮康哇软膏剂进行微生物限度检查，并对儿种方法的阳性菌冋收率结果进行数理统计。结果：试验结果表明，要客观、真实、准确地检查出酮康哇软膏制剂的真菌类微生物污染状况，不能采用单一的离心集菌法，而需将儿种方法综合应用。结论：离心集菌加薄膜过滤法综合应用是酮康哇软膏制剂微牛物限度检查的较可行的方法。关键词：微生物限度；方法验证；复方酮康畔软膏、八—I--.刖S2005版《中国药典》中有关微生物限度

2、检查法增加了方法验证的内容，这一要求完善了微牛物限度检查研究的内容。当供试胡为新的产胡或供试品的检验条件发牛改变时，应进行方法验证试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。因为方法验证是方法研究的重要内容，只有通过方法验证证明可行的方法方可用于相应项目的检测。微生物限度检查法验证的目的是确认所采用的方法是否适合于供试品的微生物限度检查。部分制剂本身具有抑菌或杀菌作用，如本文所用的酮康畔软膏剂或某些眼用软膏剂，某些含生物碱的中约复方制剂等，所制备的供试液本身具有影响微生物生长的作用，若不经方法学验证，难以保证所采用方

3、法的适合该供试晶的微牛物限度检查，难以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。实际上，微生物限度检查主要是考察待测物受微生物污染的程度，检查内容包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查，方法验证就应针对细菌、霉菌、酵母菌计数方法和控制菌的检查方法进行验证。酮康卩坐为咪卩坐类抗真菌药，可抑制真菌细胞膜麦角帑醇的生物合成，影响细胞膜的通透性而抑制其牛长，对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌有效。其还有抑制他子转变为菌丝体的作用，可防止进一步感染⑴。方法验证验证用菌株包括药典规定的五种致病菌：金黄色葡萄球、枯草芽砲杆菌、大肠埃

4、希菌、口色念珠菌、黑曲霉，其中口色念姝菌及黑曲霉属于真菌类，酮康畔软膏将对它们产生有效的抑制作用，当利用常规方法进行微生物限度检查时无法客观地发现药胡被真菌污染的情况。因此，供试品含有抑菌活性时，供试液应消除其抑菌活性后，再依法检查。常用的方法有：（1）培养基稀释法，取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，使不具抑菌作用；（2）离心沉淀集菌法，取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清再离心），弄去上清，留底集菌液约2nd,加稀释剂至原

5、规定量；（3）薄膜过滤法，取供试液直接过滤，或加至稀释剂中，混匀，过滤。用无菌PH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液(或无菌吐温-80氯化钠-蛋白H东缓冲液)冲洗滤膜，每次冲洗量为50ml,冲洗后取出滤膜贴于培养基平板上培养；(4)屮和法，凡含汞，碑或防腐剂等冇抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分，屮和剂或灭活剂可加在所用的稀释剂或培养基屮。本文屮尝试了上述各方法找到合理的办法冇效分离酮康哩药物的抑菌活性，达到药典中微生物限度检查的耍求。此外，所用供试品为乳膏剂型，由丁其水不溶性，在均匀分散供试品制成1：20

6、供试液时，耍利用到无菌的吐温-80或十四烷酸异丙酯到达均匀分散的目的，因此，对于加入吐温-80或十四烷酸异丙酯的稀释剂，述应进行稀释剂的验证以确定加入的表而活性剂对微生物的生存是否冇影响。稀释剂间的差异对各种微生物的检出均存在着不同程度的影响。这一现彖的存在告戒我们在微生物限度检验工作屮，特别是在样品复查时，务必要考虑到这些影响因素的存在。为确保检验结果的一致性和准确性。实验条件应尽可能地保持一致，消除差异，方可得到正确结果叫1.实验材料1.1样品复方酮康哩软膏剂(批号090623),由山东鲁抗辰欣药业有限公司提供。1.

7、2试验菌种试验用菌均购口江苏省药检所或者由木实验室保存，分别是：大肠杆菌(Escherichiacoli)CMCC(F)44102金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003枯草杆菌(Bacillussubtilis)CMCC(B)63501白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001黑曲霉菌(Aspergillusnigcr)CMCC(F)98003铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC(F)101041.3培养基及稀释液各种试剂

8、来源如下表所示。0.9%无菌氯化钠，pH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液，0.1%蛋白腺水溶液等按照《屮国药典》2005年版冇关方法配制。营养肉汤培养基（批号090226）北京三药科技开发公司改良马丁培养基（批号081126）北京三药科技开发公司玫瑰红钠琼脂培养基（批号090213）北京=药科技开发公司亚碼酸钠肉汤培