吡咯类抗真菌药物制剂微生物限度检查方法的研究论文

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1、吡咯类抗真菌药物制剂微生物限度检查方法的研究论文刘文杰江志杰余立高春王似锦摘要目的：研究建立吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查方法。方法：通过预试验摸索，拟以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用的方法进行此类药物的微生物限度检查并进行方法学验证。结果：按《中国药典》2005年版附录要求对拟定方法进行验证，结果验证菌株的回收率均大于70%，控制菌检查阳性菌也生长良好。结论：以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液，采用离心沉淀集

2、菌法与薄膜过滤法联用进行吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查，方法是可行的。关键词吡咯类抗真菌药物制剂；微生物限度检查；离心集菌法；薄膜过滤法AbstractObjective：Toestablishamethodofmicrobiallimittestontheantifungaldrugofpiromidic.Methods：Accordingtotheresultoftestbeforehand,.freelixedsolutionasthediluentandlotion.Themethodsofco

3、ntrifugalprecipitationandmembrancefiltrationicrobiologicaltest.Results:TheratioofrecoveriesoffivegermsentofthePharmacoeiaofChina(ChP)2005ethodissuitabletothemicrobiallimittestfortheantifungaldrugofpiromidic.Keyidic;Validationofmicrobiologicaltest;Centrifuga

4、lprecipitation;Membranefiltrationmethods吡咯类抗真菌药，如硝酸布康唑和克霉唑.freell中含菌量为50~100cfu的菌液。1.2仪器洁净工作台，医用吸引器，低速离心机等。2方法与结果2.1药典附录收载方法试验的结果将上述各药品用《中国药典》2005年版推荐的常用稀释剂pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成1∶10的供试液，依次采用药典附录收载的几种消除药物抑菌性的处理方式，即培养基稀释法（取1∶10的供试液按每皿0.2ml或取1∶100的供试液按每皿0.2ml注皿）

5、、离心沉淀集菌法和以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液的薄膜过滤法、以及将离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用进行菌落计数试验。其中，以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液，冲洗总量已达1000ml的离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用试验回收率测定结果见表1。2.2回收率测定即使采用了处理力度较大的离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用，５种验证菌株中仍有4种回收率为零，说明吡咯类抗真菌药物具有很强的抑制细菌和真菌的作用，或说明滤膜对此类药物有较强的吸附作用，目前常用的冲洗液很难将其冲洗干净，国内常用的几种处理方

6、式均不适用于此类药品。2.3不同配方稀释剂与冲洗液的效果比较参考《中国药典》2005年版1、《欧洲药典》第5版2，配制了下列5种稀释剂与冲洗液，详见表2。选用一批克霉唑阴道片，依次试验上述5种稀释剂与冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用，比较实验效果，详见表3。上述结果表明，采用欧洲药典配方溶液且卵磷脂为进口试剂，或采用自拟5号溶液作为稀释剂与冲洗液均对消除药品的抑菌性效果较为满意，但当卵磷脂改为国产试剂时，由于溶液呈混浊状，无法进行过滤。将卵磷脂和聚山梨酯80的量降为欧洲药典配方量的一半时，溶液澄清度

7、可不受试剂质量影响，同时冲洗效果也可满足实验要求。2.4建立的方法2.4.1根据上述试验结果建立方法取供试品10g，加入含有无菌组氨酸-卵磷脂-聚山梨酯80的混合溶液（配制方法见后）至100ml，在45℃保温振摇至供试品分散均匀，制成1∶10的均匀供试品储备液。细菌计数、霉菌和酵母菌计数均采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用。取1∶10的供试品储备液50ml，以500r/min的速率离心5min，取全部上清液，加上述混合溶液至50ml，再以3000r/min的速率离心20min，取底部集菌液约5ml，加上述混合

8、溶液至50ml，即为1∶10的供试液（乳膏等制剂可略去沉淀步骤）。取1∶10的供试液1ml，加至上述混合溶液100ml中，用薄膜过滤器全部过滤，以上述混合溶液作为冲洗液，每次冲洗100ml，共冲洗3次，取滤膜，依法检查（《中国药典》2005年版二部附录ⅪJ）。2.4.2控制菌检查（如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等）采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用。取上述菌落计数项下1∶10的供试液10ml，加至上