病毒的分离与鉴定

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1、实验九病毒的分离与鉴定（病毒的分离与鉴定（一）1、病毒的培养与鉴定、2、病毒的、病毒的CPE过程过程3、病毒的电镜照片观察、4、流感病毒的分离鉴定（-）、流感病毒的分离鉴定（（1）鸡胚來囊腔接种法）（2）病毒的动物接种法一小白鼠脑内）病毒的动物接种法一接种流感病毒的分离鉴定（1）鸡胚尿囊腔接种法）（2）病毒的动物接种法一小白鼠脑内接种）病毒的动物接种法一目的：目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操作技术。作技术。鸡胚丿求囊腔接种法实验材料：实验材料：（1）來亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。來亨鸡受精卵、来亨鸡受精卵卵架、检卵灯。（2）碘酒、

2、酒精消毒棉球。碘酒、碘酒酒精消毒棉球。（3）灭菌的手术刀、蹑子、剪刀。灭菌的手术刀、灭菌的手术刀银子、剪刀。（4）1ml注射器及针头。注射器及针头。注射器及针头（5）病毒液流感病毒、新城鸡瘟病毒。病毒液:流感病毒病毒液流感病毒、新城鸡瘟病毒。（6）无菌胶布。无菌胶布。无菌胶布分离鉴定程序病人急性期咽喉含漱液（经双抗处理经双抗处理）经双抗处理鸡胚培养（羊水囊或丿求囊腔羊水囊或丿求囊腔）鸡胚培养羊水囊或丿求囊腔35°C,72h°C收获：收获：取羊水或球囊液作血凝试验（+）（—）盲传鸡胚两代，作血凝抑制试验盲传鸡胚两代，仍为阴性时报告阴性实

3、验方法：（1）取孵育取孵育10〜12d鸡胚鸡胚，取孵育鸡胚在检卵灯卜•画出气室界线，于胚胎附近无大界线，于胚胎附近无大血管处画出标记作为注射入口.注射入口（2）将卵置于卵架上消将卵置于卵架上，消将卵置于卵架上毒标记处，用无菌剪刀毒标记处用无菌剪刀尖在标记处打一小孔.尖在标记处打一小孔实验方法：（3）用灭菌注射器吸取流感病毒液用灭菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入由小孔刺入0.5cm后，进行注射进行注射.由小孔刺入后进行注射⑷注射后用无菌胶布注射后，用无菌胶布注射后封孔，置35度温箱孵育封孔置度温箱孵育.度温箱孵育（5）每日在

4、灯下检视鸡每日在灯下检视鸡胚情况（若鸡胚在接种胚情况若鸡胚在接种后24h内死亡为非特界内死亡为非特界性死亡，应弃Z性死亡应弃Z）.应弃Z病毒的动物接种法一小白鼠脑内接种实验材料（1）脑炎病毒悬液脑炎病毒悬液.脑炎病毒悬液（2）小门鼠小白鼠（3W龄）.小门鼠龄（3）lml的注射器、针头的注射器、的注射器针头.（4）碘酒、酒精棉球碘酒、碘酒酒精棉球.实验方法：实验方法⑴以左手将小白鼠头部和体部固定于台面以左手将小白鼠头部和体部固定于台面.以左手将小口鼠头部和体部固定于台面（2）用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位用碘酒、用碘酒酒精棉球

5、消毒头部右侧眼、病毒的动物接种法一小口鼠脑内接种（3）以lml的注射器抽提病毒悬液以右手持注射器以的注射器抽提病毒悬液，以右手持注射器的注射器抽提病毒悬液以右手持注射器，将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺入颅腔，约进针约进针2~3mm,注入量注入量0.02~0.03ml.入颅腔约进针注入量（4）注射完毕将用过之物煮沸消毒注射完毕,将用过之物煮沸消毒注射完毕将用过之物煮沸消毒.实验结果：实验结果接种后每FI观察动物2次动物一般在接种后动物一般在接种后3/d后接种后每日观察动物次.动物一般在接种后后开始发病，食欲减退活动迟缓，耸毛

6、震颤、卷曲、食欲减退，活动迟缓耸毛、开始发病食欲减退活动迟缓耸毛、震颤、卷曲、尾强直，逐渐导致麻痹瘫痪而死亡.逐渐导致麻痹、尾强直逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡