生物质谱技术在蛋白质结构鉴定中的应用进展.pdf

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1、中国生化药物杂志Z6E49A9[3V>4B<89VDE8A,""(年第,卷第*期("$生物质谱技术在蛋白质结构鉴定中的应用进展郑永红综述，杨松成审校（国家生物医学分析中心，北京!""#$"）摘要：综述了生物质谱技术在蛋白质结构鉴定中的应用新进展，讨论了生物质谱在蛋白质初步鉴定、翻译后修饰的鉴别、蛋白质%蛋白质间相互作用等研究方面的应用趋势，以及一些最新发展，指出了生物质谱技术现存的主要问题，探讨了可能的解决方案。关键词：生物质谱；蛋白质结构鉴定；电喷雾电离；基质辅助

2、激光解吸附电离中图分类号：&$!"’(文献标识码：)文章编号：!""$%!*+（#,""(）"*%"("$%"(!"#"$%&’()’"**(+,&&-.#,%.($/.(-().#,-0,***&"#%’(0"%’1.$#2,’,#%"’.3.$)&’(%".$*%’4#%4’"-./012345%6345，2)017345%86945（!"#$%&"’()&#)*%+,$%-).$/"’0&"’12$2，,)$3$&4!""#$"，(5$&"）,"世纪+"年代，;<8=<>?<49等运用等离子体解吸（

3、@?@DE34，FG）的离子化技术，使得质谱技术从原来的有机小在氮气的帮助下形成多电荷离子的雾，这一离子化条件较其分子结构测定扩展到相对分子质量大于几千以及难以气化它方式更加缓和，因此无论是共价键或非共价键结合的化合的多肽和蛋白质分子。,"世纪#"年代，H<>I9>等又引入快原物都可以检测，其谱图直接显示为多电荷峰，经转换得到单子轰击电离（J)H）技术于质谱分析，使得多肽和蛋白质结构电荷分子离子峰。/7M的优势在于它是众多软电离方式中最

4、测定更为准确并得以推广应用。,"世纪#"年代末，崭新的“软”的一种，能与液相色谱或毛细管电泳联用。生物质谱技术得到发展，它们分别是电喷雾电离（9?98D>3A@>EN生物质谱用于蛋白质鉴定，可有两种方式，最简单、最常C9A3>@DE34E34EL

5、质量于蛋白质，由于各种蛋白质的氨基酸序列不同，酶解后产生的测定问题。而且，/7M和;)OGM在灵敏度、准确度和分析的肽段序列也各异，肽混合物质量数也具特征性。通过数据混合物的复杂性方面都比以前的质谱技术有了显著的改善，库检索软件将实验所得肽质量数与数据库中每种蛋白质的从而大大拓宽了质谱技术在蛋白质领域中的应用。酶解理论肽质量数相比较来鉴定蛋白质。用F;J鉴定蛋白!仪器的基本原理质消耗少，效率高，肽谱制备阶段可同时处理多个供试品，适!’!;)OGM%PQJ%;7合大规模、高通量的蛋白质鉴定工作。另外一种方式

6、是肽序以具有强紫外吸收的小分子有机酸作为基质，与蛋白质列标签（A9UV9489D<5A）的方法，利用肽段的序列信息和质量数供试品以$"""R!的比例混合加在不锈钢靶上形成共结晶，来鉴定蛋白质。;)OGM%PQJ%;7常用于F;J，而/7M%;7W;7基质吸收紫外激光（0,激光源，波长((+4B）的能量，形成激常用于肽序列标签的测定。这两种方式的灵敏度都很高，可发态，导致蛋白质的电离和气化，在电场加速下进入真空飞达到=B3（?!"X!$B3?WO），甚至

7、器，飞行时间正比于离子质荷比的平,’!F;J方根，绝大多数离子可带S!TS(个电荷，谱图一般为多次F;J已成为蛋白质研究中最有效的工具，仪器所测肽质扫描的累加。这种仪器的优势在于简便、直观、蛋白质混合量数越精确，F;J检索的结果就越可靠，将;)OGM%PQJ%;7用物不经分离可以直接进行测定，基本不产生碎片峰，同时，它于F;J，从技术上推进了蛋白质的研究。的灵敏度之高是其它类型质谱仪所不能达到的。;)OGM%PQJ%;7与/7M相比，可耐受较高的盐量和杂质，!’,/7M%;7酶解后的供试品可直接上样。但为

8、了获得较理想的F;J，最电喷雾电离源通常接一个单极或三极、四极质量分析好还是在上样前进行脱盐处理以提高灵敏度。脱盐一般使用-MFPMF或装有反相色谱填料的小柱子。通过内标法校正收稿日期：,"",%!,%!,；修回日期：,""(%"(%"(的;)OGM%PQJ%;7，其测定F;J的准确度在!"Y!"X*T("Y作者简介：郑永红（!:+!%），女，山西大同人，硕士，主要从事药物!"X*之间。同时，由于供试品处于结晶状态，;)OGM