ms培养基的配方与灭菌.doc

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1、MS培养基（用于分离）的配方与灭菌植物组织培养屮常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。培养棊母液的配制和保存MS培养基含冇近30种营养成分，为了避免每次配制培养基部要对这几十种成分进行称量，可将培养基屮的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20（50mL）或1/200（5mL），加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列岀，供配制时使用。大最元素（母液I）mg/LNH4NO333000KNO338000CaCI2-2H2O8800MgSO4-7H2O7

2、400KH2PO43400微帚元素（母液II）KI166H3BO31240MnSO4-4H2O4460ZnSO4-7H2O1720Na2MoO4-2H2O50CuSO4-5H2O5CoCI2-6H2O5铁盐（母液III）FeSO4-7H2O5560有机成分(母液TV)IVA肌醇20000IVB烟酸100盐酸毗哆醇(维生素B6)100盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400以上备种营养成分的用量，除了母液I为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液I、母液II及母液IV的配制方法是：每种母液屮的几种成分称量完毕示，分

3、别用少量的蒸镭水彻底溶解，然示再将它们混溶，最后定容到1Lo母液HI的配制方法是：将称好的FeSO4-7H2O和Na2-EDTA-2H2O分别放到450mL蒸憎水屮，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至55,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶屮。衿种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、口期等，保存在冰箱的冷藏室屮。MS培养基屮还需要加入2,4■二氯苯氧乙酸(2,4-D).蔡乙酸(NAA)、6节基嚓吟(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(01mg/mL)o其配制方法是：分别称取这3种物质备10mg,将2,4

4、・D和NAA用少量(1mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1mL)的物质的最浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL,即得质量浓度为01mg/mL的母液。配制培养液用量筒或移液管从各种母液屮分别取出所需的用量:母液I为50mL,母液II、HI、IVA和TVB各5mL。再取2,4D5mL、NAA1mL,-与备种母液一起放入烧杯屮。配制培养液时应注意：①在使川提前配制的母液时，丿应在量取各种母液Z前，轻轻摇动盛放母液的瓶了，如果发现瓶屮有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②川最筒或移液管最取培养

5、基母液Z前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蒸糖30g,放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸脩水750mL,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，肓到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂屮，最后加蒸彳留水定容至1000mL,搅拌均匀。需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程屮，操作者千力不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表血不能沾水，否则加热时

6、烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH用滴管吸取物质的最浓度为1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基屮，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（54〜70）测培养基的pH,—直到培养基的pH为58为止（培养基的pH必须严格控制在58）。培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯屮，然后将烧杯屮的培养基倒入锥形瓶（50mL或100mL）屮。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶畢上。锥形瓶屮培养基的量约为锥形瓶容量的1/5〜1/4。每1000mL培养基，可分装25〜30瓶。培养基分装完毕示，丿应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（每块大小约为9cmx9c

7、m）+间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在傩形瓶外壁贴上标签。高压灭菌培养基的高圧灭菌包括以下几个步骤。第一，码放锥形瓶。将装有培养基的傩形瓶肓立于金属小筐屮，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶Z间放一块玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸脩水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶似上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养血、剪刀、解剖刀、银了、滤纸、铅笔等。笫三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98kPa、121.3°C下，灭菌20min。灭菌麻取出锥