猪塞内加谷病毒（SVV）的分离鉴定及致病性研究.pdf

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1、学校代码：10564学号：2013202533分类号：S858.28密级：硕士学位论文猪塞内加谷病毒（SVV）的分离鉴定及致病性研究赵晓亚指导教师：马静云副教授学院名称：动物科学学院专业名称：动物营养与饲料科学答辩委员会主席：毕英佐研究员中国·广州2016年6月华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：日期：学位论文提交

2、同意书本学位论文符合国家和华南农业大学关于研究生学位论文的相关规定，达到学位授予要求，同意提交。导师签名：日期：学科带头人签名：日期：摘要猪塞内加谷病毒（SenecaValleyvirus，SVV）属于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）Senecavirus病毒属成员，可引起猪鼻镜及蹄冠处出现水疱、溃烂创面从而导致跛足甚至死亡。本研究采用传代细胞(猪肾细胞)从猪组织器官研磨物中分离出4株SVV，分别命名为SVVCH-01-2015、SVVCH-02-2015、SVVCH-03-2015、SVVCH-04-2015。并对4株SVV中国分离株进行全基因组序列测定。根据发表在Gen

3、BankSVV保守序列3C基因，设计特异性引物和探针；构建含3C基因序列的重组质粒作为阳性标准品，建立针对SVV检测的TaqManReal-TimePCR检测方法。将SVV细胞分离株攻毒4日龄健康仔猪，观察临床症状、病理变化，检测感染动物组织器官中的病毒载量。病毒分离鉴定结果表明：病毒分离液在第一代24h后即可产生CPE，随着传代次数的增加，出现CPE的时间缩短，细胞病变程度亦随之加剧，且可在PK-15细胞上稳定增殖。全基因组序列比对结果表明，SVVCH-01-2015与SVVCH-02-2015、CH-03-2015、SVVCH-04-2015的相似性为97.6%；SVVCH-02-20

4、15与SVVCH-03-2015、SVVCH-04-2015的相似性为99.9%；SVVCH-03-2015与SVVCH-04-2015的相似性为100%。4株SVV中国分离株与2008年美国分离株SVV-001相比，相似性为94.3%-94.4%之间；SVVCH-01-2015与2015年美国新分离株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均为96.8%；SVVCH-02-2015、SVVCH-03-2015、SVVCH-04-2015与2015年美国新分离株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均为98.0%；SVVCH

5、-01-2015与2015年巴西新分离株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/MG1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均为97.1%；SVVCH-02-2015、SVVCH-03-2015、SVVCH-04-2015与2015年巴西新分离株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/MG1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均为98.2%；SVVCH-01-2015与SVVCH-03-2015、SVVCH-04-2015与加拿大株11-55910-3相似性均为96.7%；SVVCH-02-2015与加拿大株11-55910-3相似性均为96.

6、6%。4株SVV中国分离株均位于Senecavirus病毒属，与Senecavirus病毒属毒株同源性最高，由此可以确定所分离到的4株均属于Senecavirus病毒属。TaqManReal-TimePCR检测方法的结果显示，TaqManReal-TimePCR用标准品2所构建的标准曲线相关系数（R）达到0.999以上；可以检测到标准品下限浓度为12×10copies/µL；只以SVV的cDNA为模板的反应呈现阳性荧光信号，而以其它病毒I的cDNA/DNA为模板所进行的Real-TimePCR均未检测到阳性荧光信号；组内与组间试验的变异系数均在0.96以下。本研究建立的TaqManReal

7、-TimePCR方法灵敏度高，特异性强，重复性好。TaqManReal-TimePCR检测方法的成功建立，为SVV的定性检测和定量分析提供了有效的技术平台。动物致病性试验结果表明：（1）运用人工感染方式成功在4日龄仔猪身上发现临床症状和病理变化，证明SVV对仔猪具有致病性。（2）通过同居感染处理证明SVV可能是一种接触传染病且传播速度较快。（3）SVV可在4日龄仔猪内体成功复制且病毒可能在肺、脾、扁桃体、脑部和心脏中成功