液相色谱-串联质谱法同时测定猪尿中23种违禁药物.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第8期2013年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1254—1258DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．21239液相色谱．串联质谱法同时测定猪尿中23种违禁药物王旭峰赵丽张高奎杨建文卞愧王宗楠杨海翠贺利民“(华南农业大学兽医学院兽医药理研究室，广州510642)(东莞出入境检验检疫局综合技术中心，东莞523000)摘要建立了液相色谱一电喷雾串联质谱同时测定猪尿液中口一受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类和镇静剂类等23种违禁药物多残留分析方法。猪尿试样真空冷冻干燥后，采用A

2、npelMCX固相萃取小柱净化，经CNWAthenaC色谱柱(150minx2．1mm，5Ixm)分离，多反应监测模式下进行定性与定量分析。采用基质匹配标准溶液校正，23个药物响应值与其相应质量浓度在0．5～100g／L范围内呈良好的线性关系，相关系数(r)大于0．99；以3倍和10倍信噪比计算得到的方法检出限和定量限分别为0．5～4．0g／L和1．0～10L；在4个添加水平定量限、10、20及50L，猪尿中23种药物的平均回收率为50．2％～97．7％；日内相对标准偏差(RSD)小于10％，日间RSD小于18％。应用此方法检测200批次不同来源猪尿，其中2批次检测出克伦特罗，

3、浓度为4．45和2．16L。关键词液相色谱一串联质谱；违禁药物；多残留检测；猪尿1引言随着畜牧业生产中兽药及促生长剂的广泛使用，动物性食品中兽药残留问题Et益成为关注的焦点J。农业部235号公告中明确规定禁止用于食品动物和不得在动物性食品中检出的药物有33种，目前，对这些违禁药物残留的分析检测需采用多种分析方法j，开展动物性食品中违禁药物高通量分析方法研究具有重要意义。采用液相色谱．串联质谱(LC．MS／MS)分析检测畜禽肉、水产品、鸡蛋及牛奶基质中几十种兽药残留[10]和环境水及土壤中多类兽药残留的报道较多，但有关多类禁用药物多残留检测的报道较少。王培龙等报道了分子印迹固相萃

4、取Gc—Ms法测定猪尿中4种口．受体激动剂／2]。本研究有别于传统的液．液(固)萃取前处理，采用真空冷冻干燥技术，建立了猪尿中克伦特罗等一受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类和镇静剂类等农业部235号公告中22种违禁药物及莱克多巴胺的多类多残留分析检测方法。本方法简单、灵敏、可靠，各项技术指标满足动物性食品中禁用药物残留高通量检测及确证的要求。2实验部分2．1仪器与试剂Agilent1200高效液相色谱系统(美国安捷伦公司)；API4000三重四极杆质谱仪(美国应用生物系统公司)；AnpelMCX固相萃取小柱(60mg，3mL，上海安普科学仪器有限公司)；真空冷冻干燥机(德国Thy

5、racontElektronicGmbH公司)。对照品(中国兽医药品监察所，中国药品生物制品检定所，美国Sigma公司及德国Dr．EhrenstorferGmbH公司)，甲醇、乙腈及甲酸(色谱纯，美国FisherScientific公司)，其它试剂为分析纯。2．2实验方法2．2．1猪尿样品前处理猪尿试样真空冷冻干燥后，残渣用10％甲醇．水(含0．1％甲酸)溶液溶解，离心，待净化。用甲醇、水和2％甲酸活化平衡固相萃取小柱，上样后，依次用2％甲酸和10％甲醇淋洗，2012—12-09收稿；2013-03—15接受本文系国家自然科学基金(No．31072166)和东莞市高等院校科研机

6、构科技项目(No．113)资助}E-mail：liminokhe@scau．edu．cn第8期王旭峰等：液相色谱一串联质谱法同时测定猪尿中23种违禁药物12555％氨化甲醇洗脱。洗脱液吹干后用10％甲醇．水(含0．1％甲酸及10mmol／L乙酸铵)溶液超声溶解，过0．22m滤膜，待测。2．2．2基质匹配标准工作液取100IxL适当浓度的23种混合标准溶液，与按2．2．1节处理的空白猪尿溶液900txL，涡旋混匀，配制0．5，1，2，5，10，20，50和100g／L的基质匹配标准工作液。2．3色谱-质谱条件CNWAthenaC18色谱柱(150mm×2．1mmi．d．，5Ixm

7、)。流速：0．25mL／min。流动相：A为0．1％甲酸溶液，B为乙腈。梯度洗脱条件：0～8min，95％～45％A；8～11min，45％～5％A；11～15min，5％A；15～16min，5％～95％A；16～23min，95％A。电喷雾离子源(ESI)：多反应监测(MRM)正离子模式；离子源温度：650cI=；电喷雾电压(IS)：4kV；气帘气压力(CUR)、雾化气压力(GS1)及辅助气压力(GS2)分别为138，379和414kPa。3结果与讨论3．1仪器条件优化3．1．1质谱条件