db13 t 1006-2009 鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留 高效液相色谱-荧光检测法.pdf

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1、ICS13C53DB13河北省地方标准DB13/T1006-2009鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留高效液相色谱一荧光检测法2009-03-09发布2009-03-24实施河北省质量:技术监督局发布DB13/T1006-2009.‘‘..山.oI1吕本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。本标准起草单位:秦皇岛正大有限公司、秦皇岛市标准化协会。本标准主要起草人:刘俊华、丛思羞、石丽敏、鹿翠珍。DB13/T1006-2009鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留高效液相色谱一荧光检测法范围本标准规定了鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量检测的原理、仪器、提取和净化。本标准适用于鸡肉中恩诺沙星、环丙沙

2、星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定;鸡肝脏、肾脏中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定也可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙睛提取，用正己烷净化，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。4试剂与材料4.，所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。

3、4.2试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。4.3乙睛。4.4饱和正己烷:用乙睛饱和。4.5正已烷。4.6无水硫酸钠:分析纯，经640℃灼烧4h后，贮于密闭容器中备用。4.70.01moUL四T基澳化按溶液(pH=3.0):称取3.22g四丁基滨化按，用1000mL水稀释，冰醋酸调解pH值到3.004.8恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品:纯度)95.0%04.9恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准储备溶液:分别称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品10.0mg(按实际含量折算)，用0.03mol/LNaOH溶液10mL溶解，再用乙睛稀释定容于100mL棕色容

4、量瓶中，此溶液浓度为1005g/mL。各标准储备溶液置于2`C^-8℃冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用液用流动相稀释至适当浓度，使用时现配现用。!"i仪器15.高效液相色谱仪。配有荧光检测器。25.高速组织均质器，转速10000rpm以上。35.旋转蒸发器。45.离心机。55.涡旋混合器。DB13/T1006-20095.6精密分析天平(感量0.0001g);天平(感量0.01g)05.7振荡器。5.8搅肉机。5.9尼龙微孔过滤膜:c0.25m06色谱条件6.1色谱柱:ZORBAXSB-AQ4.6X250mm,55m或相当者。6.2流动相:0.01mol/L四T基澳化钱(pH=3.0)

5、+乙睛=(97.5+2.5,VN)o6.3流速:1.0mL/mino6.4检测波长:激发波长280nm，发射波长450ran,6.5柱温:40cC6.6进样量:20pLo7样品处理7.1样品制备取待检胸肉(或腿肉)样品，弃去筋、皮、骨和脂肪，切成小块后，用搅肉机搅碎。7.2提取准确称取绞碎鸡肉样品5g(精确至0.01g)于50mL塑料离心管，加人10g无水硫酸钠，加25mL乙睛，用高速组织均质器于15000rpm高速均质0.8min'v1.5min后，3500rpm离心10min，移取上清液转移到另一个50mL塑料离心管中，残渣用15mL乙睛重复提取一次，合并上清液。7.3净化在合并后的上清液

6、中加入30mL饱和正己烷，置振荡器上高速振荡5min,3500rpm离心10mill,去除上层正己烷相，收集下层乙睛于蒸发浓缩瓶中，然后置40℃水浴上减压蒸发浓缩至干，准确加人2.0mL流动相溶解残渣，转移至离心管，加人2mL正己烷，置振荡器上高速振荡3min，于4000rpm离心5min.吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。8测定8.1标准工作曲线的制作配制恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星混合标准溶液，使得溶液浓度为1.05岁mL(其中氧氟沙星浓度为3.05g/mL)，分别移取1.05g/mL的混合标准溶液25L,105L,205L,505L,1005L,2005L用流动相稀释

7、成浓度分别为0.0025&L,0.015g/mL,0.025g/mL,0.055&L,0.15&L,0.25g/rL的混合标准溶液，供高效液相色谱分析，制作标准工作曲线。8.2液相色谱测定根据样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液