黄芪对缺氧缺血大鼠脑组织bcl-2及bax蛋白表达的影响

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1、翱，LJ瞄第25卷第91~]2010年5月jApplClinPediatr，Vo1．25No．9。May2010黄芪对缺氧缺血大鼠脑组织Bcl一2及Bax蛋白表达的影响郭蕴琦，郭蕴岚，郭学鹏(1．新乡医学院第一附属医院药剂科，河南新乡453100；2．新乡医学院第三附属医院药剂科，河南新乡453003；3．新乡医学院第三附属医院儿科，河南新乡453003)EfectsofAstragalusRootonBcl一2andBaxProteinExpressionsofBraininRatswithHypoxia—IschemiaGUO

2、Yun—qi’GUOYun—n，GUOXue—peng，摘要：目的观察黄芪注射液对缺氧缺血大鼠脑组织神经细胞形态及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨其对脑组织的保护作用及其机制。方法应用右侧颈总动脉结扎、60mL·L氧、940mL·L氮混合气体处理4h的方法制备缺氧缺血大鼠模型。实验分为假手术组(A组，n=10)，模型组(B组，n=20)，黄芪注射液组(c组，n=20)。3组大鼠均于脑缺氧缺血24h取脑组织标本，检测Bel-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡。结果1．HE染色：A组幼鼠额叶皮质神经元分布均匀，形态无异常。B组幼鼠

3、额叶皮质神经元排列紊乱，神经元肿胀变性，胞浆空化，部分细胞核呈颗粒样变性，核染色质边集、碎裂和溶解。亦可见胞质浓缩变暗，整个神经细胞体积缩小，胞膜皱缩，呈三角形或不规则形。胞膜与周围分界明显，有的神经元周围有空泡形成。与B组比较，c组幼鼠神经元镜下改变明显减轻。2．尼氏染色：A组幼鼠额叶皮质细胞层次清晰，胞质内尼氏体均匀蓝染。B组幼鼠额叶皮质细胞数减少，神经元排列疏松，皱缩成三角形或锥形，神经元胞体和树突内尼氏体溶解消失。与B组比较，c组幼鼠神经元丢失明显减轻。3．免疫组织化学检测Bel-2和Bax蛋白表达阳性的细胞数。A组未见B

4、cl-2和Bax蛋白阳性细胞数增多。B组幼鼠额叶皮层Be1-2及Bax蛋白阳性细胞数增多(P<0．01)。与B组比较，c组幼鼠额叶皮层Bc1．2蛋白阳性细胞数增多，Bax蛋白阳性细胞数降低(P<0．O1)。结论黄苠注射液可通过上调缺氧缺血大鼠脑组织Bcl-2蛋白表达，下凋Bax蛋白表达，Bcl一2／Bax比值升高，从而抑制神经细胞凋亡，减轻缺氧缺血所致的脑组织损伤。实用儿科临床杂志．2010．25(9l：680—68l关键词：黄芩；缺氧缺血性脑病；Bcl-2蛋白；Bax蛋白中图分类号：R722～文献标识码：B文章编号：1003—5

5、15X(20l0)09一o68O一02新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是围生期常见疾病，射等体积9g·L盐水；B组：模型组，20只，制备HI模也是引起脑性瘫痪、癫痫及智力低下的主要原因。缺氧型，术前30min经腹腔注射等体积9g·L盐水；C组：缺血性脑损伤(HIBD)可引起神经细胞凋亡，Bcl-2及Bax黄芪注射液组，20只，制备HI模型，并于术前30min经蛋白表达与细胞凋亡的关系尤为密切，Bcl-2及Bax蛋白腹腔注射黄芪注射液4．5g·kg～。3组大鼠均于脑HI表达是评价细胞凋亡程度的可靠指标⋯。黄芪是常用的24h取脑组织标本

6、，检测Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞扶正固本，补中益气的中药。研究发现，黄芪能有效对抗凋亡。脏器缺血再灌注损伤。本研究通过观察黄芪注射液对缺1．2．2标本收集应用经心脏灌流40g·L多聚甲醛氧缺血(HI)大鼠脑组织神经细胞形态及Bcl-2、Bax蛋白固定取脑法：将大鼠行100g·L水合氯醛溶液腹腔注表达的影响，探讨其脑组织的保护作用及其机制。射麻醉后，经左心室，输入4cI=的PBS液后，灌注4℃40g·L多聚甲醛，致大鼠肝脏、肺、四肢、尾部变白变1材料与方法硬。取出脑组织放入多聚甲醛中固定24h。梯度乙醇及1．1材料及实验动

7、物黄芪注射液(上海福达制药有限二甲苯脱水，石蜡包埋，在额叶按每层4Ixm进行冠状切公司生产，国药准字Z31020082)；免疫组织化学sP试剂片，行HE染色，尼氏染色及免疫组织化学染色。测定额盒(SP-9001)：美国Zymed公司产品，购于北京中杉金桥叶皮质内的Bcl-2和Bax阳性染色细胞数，计数方法采用生物技术有限公司；兔抗鼠Bcl-2多克隆抗体(SC-492)、标准网格，以“个／视野”为单位，每张切片均在观察部位兔抗鼠Bax多克隆抗体(SC-526)均为美国SantaCruz公左上、中间、右下选取3个不重叠视野观察，并计数

8、阳性司产品，抗体效价分别为1：100、1：50；IDA一2000高清细胞数，取其平均值。晰度数码显微图像分析系统：中科院北京空海科技发展1．3统计学处理应用SPSS10．0软件，数据以4-s表有限公司；健康SD大鼠50只，雌雄不限，日龄7d，体质示