实时荧光定量pcr技术在转基因检测中的应用_敖金霞

《实时荧光定量pcr技术在转基因检测中的应用_敖金霞》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第40卷第6期东北农业大学学报40(6):141~1442009年6月JournalofNortheastAgriculturalUniversityJune2009文章编号1005－9369（2009）06－0141－04实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用11*12敖金霞，高学军，仇有文，郭士成（1．东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心，哈尔滨150030；2．东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）摘要：实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化，转基因生物的环境安全和食用安全性问题

2、引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点，使RQ-PCR逐步成为转基因检测的重要工具。关键词：实时荧光定量PCR；TaqMan探针法；SYBRGreenI染料法；转基因检测中图分类号：TS207.3文献标识码：A随着有关转基因成分标签法的建立和对于转TaqMan探针法、分子信标法。另外还有MGB探针基因食品的重视程度及量化要求的提高，定性法、荧光标记引物、杂交探针（HybridizationProbe）PCR因其在转基因检测中的高敏感性差易造成假法等。下面仅对几种常用的RQ-PCR方法介绍如阳性现象，以及操作误差和一

3、些反应抑制因素带下。来的假阴性现象，使其已经不能再满足人们的需1．1TaqMan探针法要。在这种基础之上实时荧光定量PCR（Real-timeTaqMan探针是一段人工设计的可以和目标序quantitativepolymerasechainreaction，RQ-PCR）发列上、下游引物之间的序列配对的寡核苷酸，5'展起来，RQ-PCR技术不仅实现了对DNA模板的标记一个报告荧光基团，3'标记一个淬灭荧光基定量，而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、团。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具淬灭基团吸收。但在进行延伸反应时，Taq酶的实时性和准确性等

4、特点。目前实时荧光定量PCR5'→3'外切酶活性将探针酶切降解，失去荧光信已广泛应用于分子生物学、农业、医学等学科的号。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基应用和基础研究领域，并已经在转基因检测中发团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈[1-2]挥了不可替代的作用。正比。1．2SYBRGreenI染料法1RQ-PCR的基本原理SYBRGreenI是一种结合于小沟中的双链DNA实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体结合染料。在PCR反应体系中，加入SYBR荧光染系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时料，SYBRGreenI荧光染料在延伸过程中特异性地监测整个PCR进程，最后通过标准曲

5、线，对待掺入DNA双链后发射荧光信号，而没有掺入链中的测样品中的未知模板进行定量分析的方法。标记SYBR染料分子不发射任何荧光信号，从而保证荧光[2]方法根据RQ-PCR所使用的荧光化学物质，主要信号的增加与PCR产物的增加完全同步。可分为：DNA结合染料法（SYBRGreenI染料法）、2RQ-PCR在转基因检测中的应用收稿日期：2008-03-05基金项目：东北农业大学创新团队项目（CXT004-3-2）RQ-PCR的一系列优点使其在转基因产品的定作者简介：敖金霞（1977-），女，黑龙江人，博士研究生，助性检测、品系鉴定、转基因成分含量的检测中被广研，主要从事转基因作物基因检测技术方面

6、研究。*通讯作者：教授，博士生导师，E-mail:gaoxj5390@sina.com.cn泛的应用。·142·东北农业大学学报第40卷2.1确定是否为转基因产品的定性检测2.3转基因产品含量的检测利用荧光定量PCR技术，根据检测样品CT值根据RQ-PCR的定量原理，可以快速的得到的范围，即可快速准确的判断转基因成分的有无。检测样品的转基因成分的准确含量。我国己经初步到目前为止我国已经自行设计了实时荧光PCR定建立了以TaqMan为探针的荧光定量PCR法，在性检测引物32对和相对应的探针，建立了转基因部分口岸已进行转基因产品的定量检测，目前产品实时荧光PCR定性检测方法，该方法能检测TaqM

7、an探针已经被用在转基因农作物或初加工制目前国内外已报道的主要商品化转基因品种。RQ-品（玉米、棉花、水稻、烟草、大豆、豆粉）进行定[13]PCR用于转基因大豆、玉米、小麦、油菜等农作量检测，检测灵敏度均达到了0.1%（w/w）。Hird等物的检测，目前主要检测这些转基因作物中特有的利用RQ-PCR对若干植物及其加工产品的转基因成启动子35S、终止子NOS、耐除草剂基因EPSPS分进行了检测，检测结果显示RQ