大豆幼荚全长cDNA文库的构建及鉴定分析-论文.pdf

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1、第32卷第4期大豆科学V01．32No．42013年8月S0YBEANSCIENCEAug．2013大豆幼荚全长cDNA文库的构建及鉴定分析周莹，王楠，尹俊琦，姚丹，马建，曲静，王丕武(1．吉林农业大学农学院，吉林长春130118；2．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春130118)摘要：构建大豆幼荚全长cDNA文库，可为克隆与大豆产量相关基因，培育高产大豆新品种奠定基础。以吉农18大豆幼荚突变体为材料，提取大豆幼荚总RNA，反转录成单链cDNA，LD—PCR方法合成双链cDNA；PCR产物经蛋白酶K消化、Sill酶切后，采用

2、CHROMSPIN-400柱分级分离，回收500bp以上的cDNA组分。以kTriplE×2载体连接并进行体外包装，构建吉农18大豆幼荚全长cDNA文库。经检测研究构建的大豆幼荚cDNA原始文库滴度达到1．5×10pfu·mL～，重组率达92％。扩增的文库滴定达到2．6×10pfu·mL～，重组eDNA片段长度在500bp以上。结果显示构建的大豆幼荚全长cDNA文库符合高质量文库的标准，可用于进一步开展相关基因的克隆及分子生物学研究。关键词：大豆；幼荚；全长cDNA文库；SMART技术中图分类号：$336文献标识码：A文章编号

3、：1000-9841(2013)04-0455-04ConstructionandIndentificationofFull-lengthcDNALibraryfromYoungPodofSoybeanJinong18ZHOUYing，WANGNan，YINJun—qi，YAODan，MAJian，QUJing，WANGPi．WU(1．CollegeofAgronomy，JilinAculturalUniversity，Changchun130118，China；2．CollegeofLifeSciences，JilinAgn

4、culturalUniversity，Changchun130118，China)Abstract：Constructionoffull—lengthcDNAlibraryfromsoybeanyoungpodcouldlayfoundationforcloningyieldrelatedgenes．ThetotalRNAfromyoungpodofsoybeanJinong18wasseparatedandthentranscribedintosingle-strandeDNA，whichWassynthesizedinto

5、double—strandcDNAsbyLD—PCR．Double—strandcDNAswasdigestedbyProteinaseKandSill，andfraction—atedbyCHROMASPIN-400columns．ThedscDNAslongerthan500bpwerecollectedandligatedtohTripIE×2．andthenpackagingreactionforrecombinantbacteriophageswasperformed．ThetiteroftheprimarycDNA

6、librarywas1．5×10。pfu-mL～．andtherecombinantratewas92％．Thetiterofamplifiedlibrarywas2．6×10。pfu·mL一andtheinsertsizewasmorethan500bp．ResultsshowedthatlibrarytiterandrecombinationratemetrequirementsofeDNAlibrary，whichwouldfacilitatethefunc-tionalgenomicsresearchofsoybean

7、．Keywords：Soybean；Youngpod；Full—lengthcDNAlibrary；SMARTtechnology大豆是人类蛋白质的主要来源，是重要的粮食各个方面。王清连等构建了野生大豆近成熟的和油料作物。大豆种子中贮藏蛋白含量远高于其cDNA文库，并进行了大量测序，获得了一些有价值他作物，占种子干重的40％以上，是人类食物和动的基因片段和新基因。物养殖的主要植物蛋白来源，具有极高的经济价目前已报道的全长cDNA文库构建方法有Oli．值⋯。与其他农作物相比，大豆的产量相对较低，go—capping法、CAPtu

8、re法、SMART法、CAP-trapper法应用传统育种方法提高大豆产量的潜力有限，而转等⋯。其中SMART方法因其所需mRNA量少，在基因技术在提高大豆产量方面展示了良好的反转录成cDNA前不需任何酶反应处理，操作简单、前景。快速等优点而越来越受到研究人员的青睐。因全长c