2019年临床医学检验技师考试《微生物检验》辅导讲义 分支杆菌属及检验.doc

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1、分支杆菌属及检验•考点结核分枝杆菌♦生物学性状；临床意义；微生物学检查非典型分支杆菌♦概念、种类；鉴别培养方法；检验方法学评价麻风分支杆菌【内容讲解】分枝杆菌属：一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分枝状生长的需氧杆菌。主要特点是细胞壁含有大量脂类,这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。一、结核分枝杆菌引起人和动物结核病的病原菌。ET前己知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆

2、菌。（―）生物学特性1.形态与染色：G•，细长或略带弯曲的杆菌，在培养基中可呈球状或丝状，陈I日培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝抗酸菌c既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被称为Much颗粒。2.培养特性：♦专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%-10%C02环境中可刺激其生长。需适当的湿度。本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h—代。♦固体培养基：2-6周才能长出菌落，呈干燥颗粒状,不透明，乳白色或米黄色，表血呈皱纹状，形似菜花。♦液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。

3、有毒力菌株在液体培养基中可呈索状牛•长，无毒株则无此现象C—♦营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。3.生化反应：♦不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性,.眠酶试验和中性红试验均为阳性。.人型结核分枝杆菌：烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性：牛型结核分枝杆菌均阴性。4.抵抗力：对洒精敏感。5.变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。毒力变异：卡介苗（BCG）——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养。于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养

4、基中经13年传种230代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力。用于预防结核病。（二）临床意义1•致病性♦不产生内毒素和外毒素，也无荚膜和侵袭性酶。♦主要致病物质：脂质♦索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）♦磷脂（形成结核结节）♦硫酸脑昔脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）♦蜡质D（引起迟发性过敏反应）♦主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。♦肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜。2.Koch现象产生细胞免疫的同时也产生迟发型超敏反应。结核杆菌迟发型超敏反应和免疫反

5、应是由不同细胞亚群细胞介导的两个独立反应可发生在同一感染机体。有«TB®以前感染过或免疫豚続正常豚鼠24・48小时•局部红肿、浅溃疡10T4天$局部红肿、溃疡I坏死，经久不愈I全身扩散3.结核菌素试验利用IV型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。本实验对婴幼儿结核病的诊断有意义。（三）微生物检验1.标本采集根据感染部位的不同，可采集不同标本。2.检验方法（1）涂片检查1）薄涂片：取痰等标本约0.01ml,涂抹于载玻片上，用萋-尼氏染色（热染法）或Kinyoun（冷染法）抗酸染色，镜检。报告方法：♦-：全视野（或100个视野）未找

6、到抗酸菌；♦+：全视野发现3〜9个：♦++：全视野发现10〜99个；♦+++：侮视野发现1〜9个；♦++++：每视野发现10个以上（全视野发现1〜2个时报告抗酸菌的个数）。2）厚涂片：取标本0.1ml,涂片，抗酸染色、镜检。3）集菌涂片：主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。4）荧光显微镜检查法：用金胺“0”染色，在荧光显微镜下分枝杆菌可发出荧光。（2）分离培养1）固体培养法：♦对于结核病的诊断、疗效观察及抗结核药物的硏究均具有重要意义。♦标本前处理，除去杂菌，接种于罗氏培养基，37°C5%-10%C02培养，至4〜8周。此方法可准确诊断结

7、核杆菌。2）液体培养法：半自动或全自动快速培养系统。3）噬菌体法。（3）基因快速诊断：♦PCR反向膜探针杂交,DNA探针，16srRNA基因序列测定,高效液相色谱（HPLC）监测分枝菌酸。♦简便快速、灵敏度高、特异性强。（4）耐药性:♦利福平耐药是由于rpoB的基因突变。♦链霉素耐药是和编码核糖体S12蛋白的rpsl基因发生突变以及编码16SrRNA的rrs基因发生突变。♦异烟脐的耐药与过氧化氢酶和过氧化物酶的失活有关。（四）治疗原则♦利福平、异烟月井、乙胺丁醇、链霉素为第一线药物。♦利福平与异烟耕合用可以减少耐药的产生。♦对于严重感染

8、，可用毗嗪酰胺与利福平及异烟月井联合使用。二、非典型（非结核）分枝杆菌♦分枝杆菌属中除结核杆菌和麻风杆菌以外。♦具有抗酸性亦称非结核抗酸菌。♦可侵犯全身脏器和组织，以肺最常见，其临床症状、X线所见很难与肺结