A组轮状病毒结构蛋白VP6在家蚕杆状病毒表达系统中的表达.pdf

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1、5cienCe≯Se础■雹囡譬誓2012，38(6)：1024—1028ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cnA组轮状病毒结构蛋白VP6在家蚕杆状病毒表达系统中的表达李司钟云平张海花应慧慧于威张耀洲(浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州310018)摘要A组轮状病毒(rotavirus，RV)是婴幼儿严重病毒性腹泻的主要病原，VP6为轮状病毒的主要结构蛋白之一，天然VP6具有很强的抗原性

2、和免疫原性。通过基因重组技术将A组轮状病毒Tl14中国地方株VP6基因克隆入转移载体质粒pBacPAK8中，并将重组质粒pBacPAK一VP6与线性化家蚕杆状病毒Bm—BacPAK6DNA共转染BmN细胞，获得重组病毒BmNPV—VP6。用BmNPV—VP6感染BmN细胞和家蚕5龄幼虫，Westernblotting检测表明在BmN细胞和家蚕5龄幼虫的血淋巴中均可检测到120kD的特异性条带，提示重组VP6蛋白在家蚕中获得表达，与VP6三体形式的大小相符合。ELISA检测结果显示，重组VP6蛋白在BmN细胞和

3、家蚕5龄幼虫血淋巴中的表达分别在感染后第4天和第6天达到最高水平。VP6在家蚕杆状病毒表达系统中的成功表达可为新型轮状病毒疫苗的研制提供新的途径。关键词A组轮状病毒；VP6蛋白；家蚕杆状病毒表达系统中图分类号$884．5文献标识码A文章编号0257—4799(2012)06—1024—05ExpressionofStructuralProteinVofGroupARotavirusinBom一o■mor／■■bIacu●loV‘irus_l==XpreSS■Ion●’VSt‘emLIsiZHONGYun—Pi

4、ngZHANGHai—HuaYingHui—HuiYUWeZHANGYao—Zhou(InstituteofBiochemistry，CollegeofLifeScience，ZhejiangSci-TechUniversity，ZhejiangProvincialKeyLaboratoryofSilkwormBioreactorandBiomedicine，Hangzhou310018，China)AbstractGroupArotavirus(RV)isthemainpathogencausingdiar

5、rheainchildren．Asoneofthemainrotavirusstructuralproteins，naturalVP6hasveryhighantigenicityandimmunogenicity．Inthispaper，尸6genefrOmChineselocalstrainT114ofgroupArotaviruswasclonedintothetransfervectorpBacPAK8byemployinggenerecombinationtechnique，thentherecom

6、binantplasmidpBacPAKR-VP6wasco．transfectedintosilkwormBmNcellstogetherwithDNAofIinearizedBombyxmoribaculovirusBm—BacPAKtoconstructtherecombinantvirusBmNPV—VP6．AfterBmN．PV—VP6wasusedtoinfectBmNcellsandthe5thinstarsilkwormsilkwormIarvae．Westernblottingdetecte

7、daspecificbandof120kDmolecularweightbothinBmNcellsandinhemolymphofthe5thinstarsilkwormlarvae．indicatingthattherecombinantproteinVP6wasexpressedinsilkwormandtheexpressedproteinwasconsistentwiththesizeoftrimericfOrmofVP6．ELISAassayindicatedthattheexpressionof

8、recombinantproteinVP6reachedmaximalleveIinBmNcellsonthe4thdaypost—infectionandinhemolymphofthe5thinstarIarvaeonthe6thdaypost．infection．ThesuccessfuIex．pressionofVP6inBombyxmoribaculovirusexpressionsyst