间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达.pdf

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1、2014，40(4)：0672—0680ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cn间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达盛稳稳郭庆拓陈剑清崔立旺张耀洲。于威舒特俊盛清(浙江理工大学生物化学研究所，杭州310018；浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州310018；天津市国际生物医药联合研究院，天津310450；天津大学，天津310450；宾夕法尼亚州立大学，美国宾夕法尼亚州16802)摘要间日疟疾传

2、播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白，可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖，有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径，进行了Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中表面展示表达的初步试验。首先将经过非功能区去除和密码子优化的间日疟原虫Pvs25基因克隆至转移栽体pFastBacHTb，构建重组质粒pET32a—Pvs25并转化E．coliRosetta菌株，诱导后成功表达了Pvs25蛋白，利用Ni．NTA亲和层析的方法纯化重组Pvs25蛋

3、白，免疫BALB／c雌鼠制备多克隆抗体，利用ProteinA抗体纯化柱纯化后的抗体经间接ELISA法测定其效价为1：12800；利用Bac．to—Bac系统构建含25基因的重组杆状病毒vBmPvs25，接种BmN细胞和家蚕5龄幼虫，经SDS—PAGE与Westernblotting分析表明Pvs25在BmN细胞和幼虫中均成功表达；构建vBmgp64一CMV—Pvs25表面展示重组病毒，检测到Pvs25在BmN细胞中表达并展示于细胞和杆状病毒囊膜上。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统生产间日疟疾传播阻断候选疫

4、苗奠定了一定的试验基础。关键词间日疟原虫；Pvs25蛋白；传播阻断疫苗；家蚕杆状病毒表达系统；表面展示；多克隆抗体中图分类号Q786文献标识码A文章编号0257-4799(2014)04-0672-09onofPlasmodiumvivaxMalariaTransmission-blockingVaccineCandidateAntigenPvs25inSilkwormBaculovirusExpressionSystemSHENGWen—Wen’GUOQing—Tuo’CHENJian—Qing’CUIL

5、i—Wang。ZHANGYao—Zhou，。，YUWel11SHUTe．Jun’SHENGQing’(。InstituteofBiochemistry，ZhejiangSci-Te}chUniversity，Hangzhou310018，China；ZhejiangProvincialKeyLaboratoryofSilkwormBioreactorandBiomedicine，Hangzhou310018，China；。TianjinInternationalJointAcademyofBiotechno

6、logyandMedicine，Tianjin310450，China；TianjinUniversity，Tianjin310450，China；。ThePennsylvaniaStateUniversity，Pennsylvania16802，USA)AbstractPvs25，avivaxmalariatransmission—blockingvaccinecandidateantigen，isasurfaceproteinofPlasmodiumvivaxexpressedduringitssexu

7、alreproduction．ItcaninhibitsexualreproductionandsporereproductionofPlasmodiumvivaxparasiteinmediamosquitoes，therebyblockingthe收稿日期：2014—02—26接受日期：2014—03—23transmissionofvivaxmalariafrOmmediamosquitoesto资助项目：国家高技术研究发展计划“863”项目(No．2011AA100603)浙江省自然科学基金项目(N

8、o．207217)。humaneffectively．Toexplorenewwaysofproducingthis第一作者信息：盛稳稳(1987一)，女，硕士研究生。vaccinewithhighefficiencyandlowcost，apreliminaryE—mail：shengwen0826@126．comexpressiontestofPvs25wascarriedoutinbaculovirus通信