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《EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤生长的影响-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华肝胆外科杂志2014年8月第2O卷第8期ChinJHepatobiliarySurg,August2014,Vo1.20,No.8·599··实验研究·EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC一7721裸鼠移植瘤生长的影响张弓李捷翟文龙郭文治赵永福张水军【摘要】目的探讨RNA干扰抑制EphA7基因对人肝癌细胞SMMC一7721裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法EphA7小干扰RNA(siRNA)重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞SMMC一7721,同时设空载体转染组、未转染组和对照组。对照组不注射细胞,仅注入磷酸盐缓冲液(PBS)做对照。裸鼠移植瘤模型采用左上肢皮下注射的方法建立。应用实时P
2、CR、免疫组化和蛋白印迹方法检测移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达情况,同时比较成瘤时间、肿瘤体积和重量等。结果注射细胞后9~12天,除对照组外其余各组均可在注射部位发现肝癌移植瘤形成。移植瘤形成后第35天,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低(P<0.05)。转染干扰载体pRNA—siEphA7对裸鼠肝癌移植瘤的的抑瘤率为55%。免疫组化结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7蛋白阳性染色的细胞较少,染色较浅,呈浅黄色。实时PCR和蛋白印迹结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的
3、表达明显低于未转染组和空载体转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用siRNA抑制EphA7的表达可减缓肝癌细胞SMMC-7721在活体动物体内的生长,有望成为肝癌基因治疗的靶点。【关键词】肝细胞癌;裸鼠移植瘤;RNA干扰;基因EphA7;基因疗法RNAinterferencetargetingEphA7inhibitsgrowthofSMMC-7721cellxenograftinnudemiceZhangGD,LiJie,ZhaiWenlong,GuoWenzhi,Zhaon,ZhangShuijun.DepartmengofHepatobiliary-pan—creaticS
4、urgery,theFimtAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,ChinaCorrespondingauthor:ZhangShuijun,Email:zhangshuijun@M.edu.cn【Abstract】0bjeetiveToinvestigatetheeffectsofRNAinterferencetargetingEphA7geneonthegrowthofSMMC-7721cellxenograftinnudemice.MethodsRecombinantplasmidofEphA7gene—targ
5、e—tingsiRNAwastransfectedintohepaticcancerSMMC-7721cellsbyLipofectamine2000.comparingwiththeemptyvectortransfectedgroup,untransfeetedgroupandcontrolgroup.ThenudemicetumormodelwasestablishedbysubcutaneousiniectionofhepaticcancerceUsintheleftupperlimbofthemice.ControlgroupwasiniectedwithPBSasblank.Re
6、al—timePCR。immunohistocbemistryandWesternblotwereemployedtodetectthemRNAandproteinexpressionsofEphA7intumortissues.Thetumorformationtime,tumormassandweightoftumorwerealsoconsideredintheanalysis.ResultsAbout9—12daysaftertheinjectionoftumorcells,thexenografttumorformationcanbeobservedaroundtheinjecti
7、onsiteexceptthecontrolgroup.35daysaftertumorformation,therewereobviousdecreasesinthetumorgrowthrate,tumormass,aswellastumorweightintransfeetedgroup,comparingwithemptyvectortransfectedgroupanduntransfectedgr
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