实验六 食品中亚硝酸盐含量测定.doc

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1、实验食品中亚硝酸盐含量测定（格里斯试剂比色法）（—）目的熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。（二）原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。（三）试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。1．氯化胺缓冲液lL容量瓶中加入500ml水，准确加人20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。2

2、．0.42mol／L硫酸锌溶液称取120g硫酸锌（ZnSO4·7H20），用水溶解并稀释至1000ml。3.20g／L氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。4.对氨基苯磺酸溶液称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。5.0.1％N－1－萘基乙二胺溶液称取0.lgN－1－荼基乙二胺，加60％乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。6.显色剂临用前将0.1％N－1－萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。7.

3、亚硝酸钠标准溶液准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500ug的亚硝酸钠。8．亚硝酸钠标准使用液临用前，吸取亚硝酸钠标淮溶液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug亚硝酸钠。（四）仪器1．小型粉碎机2．分光光度计（五）操作方法1．样品处理称取约10.00g（粮食取5g）经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70ml水和12m12％氢氧

4、化钠溶液，混匀，用2％氢氧化钠溶液调样品至pH8，定量转移至200ml容量瓶中加10ml硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5m1氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20m1，收集滤液备用。2.亚硝酸盐标准曲线的制备吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml亚硝酸钠标准使用液（相当于0，2.5，5，10，15，20，25ug亚硝酸钠），分别置于25ml带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5ml氯化胺

5、缓冲液，加2.5m160％乙酸后立即加入5.0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯（灵敏度低时可换2cm比色杯），以零管调零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml亚硝酸钠标准使用液（分别相当于0，2，4，6，8，10ug亚硝酸钠）。3.样品测定：吸取10.0ml上述滤液（样品处理滤液）于25ml带塞比色管中，其它操作同上。（六）结果计算