层析(包括：吸附层析、分配层析、离子交换层析、亲和层析等).ppt

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1、层析技术（chromatography）一、简介1、层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家MichaelTswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法”（Chromatography)。后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。2、层析法是目前广泛应用的一种分离技术，是分离各种生物大分子的主要手段之一，是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。3、40年代：两位英国科学家Martin和Synge发明了分配色谱（层析），他们首先提出了色谱塔板理论，获得了1952年的诺贝尔化学奖。由此

2、，层析技术成为分离生化物质的关键技术。4、按照不同的标准层析法有不同的分类。根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可检测出层析后各组份的浓度或质量，同时绘出层析图。层析仪与电子计算机联用，可使操作及数据处理自动化，大大缩短分析时间。5、由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点，因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生物样品的分离分析。近年来，已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。在医药卫生、环境化学、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。6、在层析法实验技术有凝胶层析法、离子交换层析法、

3、高效液相层析法、亲和层析法、聚焦层析法等二、原理及概念层析技术是一类物理分离方法,根据待分离混合物中各组分物理化学性质的差别,使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中,由于各组分随流动相前进的速度不同,从而得到有效分离。例如：我们利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性及分子的大小、带电情况及离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异，使其在流动相与固定相之间的分配系数（或称分配常数）不同，达到彼此分离的目的。层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，当待分离的混合物通过固定相时，由于各

4、组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。基本概念固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的

5、液体、气体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。分配系数（distributioncoefficient）分配系数是指在一定的条件下（如温度、压力），某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值，分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据，常用K来表示Cs:溶质在固定相中的浓度，Cm:溶质在流动相中的浓度K值大表示其溶质在固定相中浓度大，在洗脱过程中溶质出现较晚K值小表示某溶质在流动相中浓度大，故在洗脱液中出现较早有相似的K值，则表明两组分层析峰会发生重叠，分离效果差分配系数主要与下列因素有关：①被分离物质本身的性质②固定相和流动相的性质③层析柱的温

6、度。不同的层析机理，其K值函义不同:吸附层析中K值表示吸附平衡常数分配层析中K值表示分配系数离子交换层析中K表示交换常数亲和层析中K表示亲和常数。迁移率（Rf或比移值）是指：在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。常用Rf来表示迁移率实验中我们还常用相对迁移率的概念。相对迁移率是指：在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。常用Rx来表示分配系数与迁移率的关系K值大，就表明该组分与固定相结合力大，迁移率小；反之则结合力小，迁移率大K增加，Rf减少；反之，会减少，Rf增加不同

7、物质的分配系数或迁移率是不同的。分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件。其差异越大，分离效果越理想。操作容量：在特定条件下，某种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量。每克（或毫升）基质结合某种成分的毫摩尔数（或毫克数）。数值大，结合力强。膨胀度（Vβ)：在一定溶液中，单位重量的基质充分溶胀后所占有的体积；即每克溶胀基质所具有的床体积。床体积（Vt)三、分类1、按两相所处状态分类2、按层析原理分类名称分离原理吸附层析法组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂，各能力不同分配层析法各组份在