HCV核酸定量检测ppt课件.pptx

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1、丙型肝炎病毒核酸定量检测技术PCRfluorescencequantitativeGotyouthinking?HepatitisCVirus的基因结构3’UTR有多聚U区域(polyU)及1段高度保守的98个碱基的区域，称为X-tail。不同基因型的HCV的多聚U有不同的长度。3’UTR末端150个核苷酸序列(包括多聚U区和3’X-tail)含有HCV复制所必需的33’顺式复制元件，可能作为启动子来起始负链RNA的合成。Wethikn5′UTR进行序列信息比对TheperformanceoftheblastGenBank查找

2、全序列DNASTAR软件包中的MegAlign软件，采用ClustalW法确定引物设计序列中国大陆HCV感染的趋势：中国大陆HCV流行基因型主要为1，2，3和6型，没有发现4和5基因型。中国大陆地区最常见的基因型为1b和2a，流行率为73.1%和18.5%，其次为3a，6a，3b，6n和1a。基因3型和6型的地理分布越来越广。常用的技术荧光染料法荧光探针法Real-timequantitativePCR定量检测常用方法改进建议TaqMan®/TaqMan-MGB®SYBRGreenIMolecularBeacon绝对定量标准曲

3、线由已知浓度的RNA、质粒或合成的寡链核酸生成定量未知模板标准样品和未知样品同时反应先用特异性引物（反向）进行反转录扩增，再以合成的cDNA为模板，以特异性引物（正、反向）进行PCR反应Rotor-GeneQInstrumentsOthers…MGB探针、分子信标此外，现在的试剂盒都是单样本检测，实际运用起来效率比较低同时灵敏度也不够高。高通量高灵敏检测试剂盒开发