最新结核病实验室快速诊断方法介绍教学讲义PPT课件.ppt

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1、结核病实验室快速诊断方法介绍主要内容细菌学诊断免疫学诊断分子生物学诊断2一、细菌学诊断快速培养噬菌体生物扩增法32．BacTALERT3D培养系统原理该系统采用产色检测技术检测培养系统中分支杆菌生长情况。因其所用的培养瓶底部有颜色感应器，当培养瓶中有细菌生长，C02产生、PH下降时，颜色感应器由绿色变成黄色。仪器自动连续检测，检测的数据输入计算机，根据计算结果自动显示培养瓶中有无分支杆菌生长。73D培养基：分支杆菌生长，产生CO2颜色感受器由禄色黄色83D检测仪93．液体变色培养基基本原理液体变色培养基中的氧化还原显示器为一

2、种无色四唑鎓(tetrazolium)盐，分支杆菌生长通过氧化还原系统，培养基中无色四唑鎓盐还原成粉红色、红色或紫色甲臢，甲臢不溶于水，以颗粒形式分泌至细胞表面，这样分支杆菌菌落就变成了用肉眼可以观察到的红或紫色。液体变色培养基阳性结果报告时间与BDBACTEC460相等，较L-J培养基提前5-10d。10二.免疫学诊断－结核抗体检测细菌学检查是结核病诊断的金标准，但是由于涂片与培养检出率低，而X线检查有一定误差及无法检出肺外结核等缺陷。而结核杆菌感染人体后，可刺激机体产生。因此，测定结核抗体及其含量有助于结核病的辅助诊断。近几

3、年来，国内外研究者采用脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、结核菌重组蛋白(38KD)等作为抗原，以胶体金标记，建立简便、快速免疫学诊断方法。11测定方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫渗滤试验（DIGFA）免疫层析试验（DICA）12结核抗体检测临床应用1）辅助诊断结核病2）作鉴别诊断3）用于疗效观察4）在结核病流行病学调查中的应用5）作为器官移植并发结核感染的监测指标13结核抗体检测优点：简便、快速3-15分钟灵敏阳性率60-95%特异特异性80-95%应用面广各部位结核14有一定的假阳性和假阴性结果判断带有主观性缺乏有效的质控手

4、段存在的问题:15结果判断带有主观性：多数采用肉眼观察法，根据显色深浅来判断结核抗体测定结果，因此带有主观性。理想的纠正方式是尽可能采用仪器测读法。缺乏质控手段：结核抗体测定技术虽发展很快，试剂反应板上也带有质控点，但只能检测试剂的质量，而无法考核检测结果的准确性。16三、分子生物学诊断利用分子生物学检测方法来检测结核杆菌特异性基因片断，从而为结核病的快速诊断提供依据。17检测方法核酸探针杂交碱基序列测定结核杆菌DNA扩增法－PCR,结核杆菌DNA链置换扩增法---SDA结核杆菌RNA扩增法－Gen-Probe基因芯片检测18１

5、.结核杆菌DNA扩增法－PCR测定PCR具有敏感、特异、快速等特点，对于MTB这类生长缓慢的病原菌诊断具有独特的意义。在我国，结核菌PCR实验研究积累了一定资料和经验，目前正处在逐步过渡到临床试用的重要转折阶段。在临床试验应用过程中确实存在一些亟待解决的问题。PCR检测假阳性和假阴性问题是影响其应用的关键问题。19对于存在的问题对策如下：扩增产物特异性鉴定－探针杂交高质量试剂（建立国家级检定考评）规范化操作（培训操作人员）质量控制（标准实验室）20PCR杂交测定方法PCR-ELISA测定PCR杂交梳测定荧光定量PCR21２.结核

6、杆菌RNA扩增法－Gen-Probe1)直接检测标本中结核分枝杆菌－MTD（MycobacteriumTuberculosisDirectTest）2)用于菌种鉴定－Accuprobe223.基因芯片检测基本原理是将多种探针固定在玻璃等基片上，然后与待测样本的DNA或RNA进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。由于该法同时将大量探针固定于支持物上，所以一次可以对样品大量序列进行检测和分析，从而解决了传统核酸印迹技术的操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。23242526

7、基因芯片快速鉴定在结核分支杆菌1998年Gingeras等利用基因芯片对10种121株分枝杆菌进行基因分型与菌种鉴定。分析了10种分枝杆菌种间与种内的序列多样性，并确证了几种特异性单碱基多态性。27基因芯片技术存在的问题需要昂贵的仪器设备，检测成本较高，芯片制备比较复杂，样品的准备与标记又较为繁琐，基因芯片上原位合成探针难免有错误核苷酸掺入，使整个杂交背景增高，降低特异性。其信号检测的灵敏度也有待于进一步提高。28比和比的应用练习11.我会填。（1）在两个数的比中，比号前面的数叫做比的（），比号后面的数叫做比的（）。比的前项除以

8、后项所得的商叫做（）。两个数相除又叫两个数的（）。前项后项比值比（2）比值通常用（）表示，也可以用（）或（）表示。分数小数整数2.我会判断。(1)比值相等的两个比，它们的前项和后项分别相等。（）×（2）比的后项可以是零。()×（3）5：9可以读作“5比9”,也可