最新结核病学实验室自动化教学讲义ppt课件.ppt

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1、结核病学实验室自动化结核病学实验室自动化长期以来,结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限,严重影响了结核病的及时诊断。因此,多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。结核病实验室诊断方法和技术涂片和罗氏培养快速培养、药敏检测技术液体变色培养基噬菌体裂解试验结核杆菌L型检查免疫学诊断分子生物学诊断培养培养的灵敏度略高于涂片法,并是鉴定活菌的可靠方法,还可进一步进行菌种鉴定和药敏试验,被誉为诊断结核病的“黄金标准”。常规罗氏培养基培养时间长,需4-8周才能出结果,而且阳性率也只有30

2、-40%;同时各种分支杆菌均可生长,需结合菌种鉴定才可确定是否为结核分支杆菌结核病实验室诊断方法和技术涂片和罗氏培养快速培养、药敏检测技术(是一种新的结核病细菌学检查方法)液体变色培养基噬菌体裂解试验结核杆菌L型检查免疫学诊断分子生物学诊断快速培养、药敏检测技术BactecTB460BactecMGIT960BBLMGIT3D快速培养、药敏检测技术BactecTB460(第一代分枝杆菌快速培养、药敏检测系统)BactecMGIT960BBLMGIT3DBactecTB460原理:分枝杆菌在含有14C标记棕榈酸的12B培养基中

3、生长、分解利用棕榈酸,产生14CO2,仪器检测系统自动测试14CO2含量,并将其换算成生长指数(GI值),GI值升高提示有分枝杆菌生长。如在12B培养基中加入一定浓度的抗结核药物,则可进行分枝杆菌的药敏试验。BactecTB460优点:可显著缩短培养时间(涂阳病例平均阳性天数9-14天),药敏试验只需5-7天,同时阳性检出率约提高10%操作简便、自动化强,还可进行快速菌型鉴定缺点:液体培养基中无法观察菌落形态污染率高于罗氏培养仪器与试剂价格较贵有放射性污染快速培养、药敏检测技术BactecTB460BactecMGIT960

4、(第二代分枝杆菌快速培养、药敏检测系统)BBLMGIT3DBactecMGIT960原理:其所使用的培养瓶底部含有包被于树脂上的荧光显示剂,由于该显示剂为氧抑制性,当分支杆菌生长使氧消耗后,荧光显示剂被激活,而发出荧光。检测系统每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度,从而判断管内分枝杆菌生长情况。BactecMGIT960国外:检测2567份临床标本方法960460L-J培养法阳性率(%)808571平均报告(天)13.314.825.7国内:湖南1449份标本(福州、汕头)阳性率(%)32.925.5(29.2、46.5)污

5、染率(%)2.36.5阳性报告(天)14(8.9、9.8)(8.8)BactecMGIT960优点:无放射性污染、快速、自动化程度更高、操作更为简便可检测范围广用于痰、支气管灌洗液、胸水、腹水、脑脊液、尿液、脓液、关节液、病灶组织或干酪块各种临床标本的分枝杆菌培养、初步菌种鉴定和药物敏感试验缺点:价格更高、需专门进口厂家专利试剂、专门设备。快速培养、药敏检测技术BactecTB460BactecMGIT960BBLMGIT(快速手工培养、鉴定、药敏检测系统)3DBBLMGIT分支杆菌快速手工培养、鉴定、药敏检测系统;该法所用

6、培养基同BactecMGIT960,只是培养和检测需手工操作;结果判断采用小型紫外检测仪或普通紫外灯检测荧光强度。BBLMGIT国外:与BactecMGIT960无显著差异国内:检测230例临床标本总检出率:39.1%(90/230)方法液体手工L-J培养法阳性率(%)34.327.4平均报告(天)1321国内:检测173例抗酸染色阴性标本方法液体手工L-J培养法阳性率(%)19.111.0平均报告(天)1321抗酸涂阳样本MGIT液体培养法阳性报告时间比抗酸涂阴标本提早7天。手工MGIT液体培养法能快速检测分枝杆菌,检出率

7、高,适合基层实验室推广应用。快速培养、药敏检测技术BactecTB460BactecMGIT960BBLMGIT3D(生物梅里埃BacTALERT3D培养系统)BacTALERT3D另一类分枝杆菌快速培养、药敏检测系统是第4代全自动培养系统可同时用于普通细菌的培养原理:采用液乳感应器检测,其所用的培养瓶底部有颜色感应器,当分枝杆菌在培养瓶中生长,有CO2产生时,颜色感应器由绿色变成黄色。仪器自动连续检测,检测的数据输入计算机,根据计算结果自动显示培养瓶中有无分支杆菌生长。可检测临床标本细菌、真菌、苛养菌、厌氧菌、结核分枝杆菌

8、和其它分枝杆菌。BacTALERT3DBrunello等用3D系统检测了1830份临床标本(包括痰、BALF、尿、血、CSF等)方法3D460L-J平均报告(天)11.711.226.8涂阳11829涂阴211836国内:阳性率%42.143.931.2初阳时间(天)16.112.825.

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