多西紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究

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1、多西紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究目录摘要IAbstractII1.1材料和试剂21.2仪器22.1细胞培养32.2细胞的维持和培养42.2.1细胞的复苏42.2.2A549细胞更换新的培养液42.2.3A549细胞的传代52.3分组给药52.4MTT溶液的配置与检测52.4.1配制6第3章实验计算以及结果73.1计算IC5073.2实验结果7参考文献101摘要目的观察多西紫杉醇诱导hepg2PC3MD-231A549四种肿瘤细胞凋零并对其作用机制进行探讨。方法培养4种细胞，取对数生长期细胞分为五组，空白

2、对照组、模型组、蜂胶黄酮高、中、低剂量组，剂量分别为200mg/L、100mg/L、50mg/L.药物预处理2h后，做MTT检测。通过实验数据计算IC50.结果各组细胞IC50值结论多西紫杉醇对肿瘤细胞有诱导凋亡作用关键词多西紫杉醇；hepg2；A549；PC3；M-231；；细胞凋亡AbstractStudyontheeffectofdocetaxelontumorcellproliferationinhibitionandintumorchemotherapy,takethecellcount,morp

3、hologicobservation,flowcytometrymethodforthedetectionandobservationrespectivelyandcombinedwithdocetaxelonproliferationofhumantumorcelllinesinnudemicebearinghumantumorinhibition;toestablishanimalmodel,totreatseparatelyandcombinedwithdocetaxel,andblankcontro

4、l.Observationofgrowthandpathologicalcharacteristicsofthetumorbody.ThroughtheexperimentsofMTTdetectiontestofdocetaxelontumorcellproliferationinhibition.Usingdifferentconcentrationsoftumorcellsuppressiontest,theinfluenceoftheconcentrationonthesurvivaloftumor

5、cells.Theexperimentisdividedintotwoparts,respectively,andMTTdetectionofcellculture.Keywords:DocetaxelStemcellsResearchApplication前言紫杉类药物属于红豆杉的树皮或针叶中提取或半合成的新抗肿瘤药物，作用在微管以及微管蛋白系统，紫杉类药物与其他植物碱不同，紫杉类药物通过促进微管双聚体装配成微管通过防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G和M期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。目前该类

6、药物临床上有紫杉醇和多西紫杉醇docetaxe1等。采用多西紫杉醇治疗法具有来源广泛、容易获取、可迅速扩增、自体移植无免疫排斥等诸多优势，使其在细胞治疗及组织工程方面具有重要的研究价值及广阔的应用前景。10第1章仪器与试剂1.1材料和试剂多西紫杉醇；A549细胞（肺肿瘤细胞）M-231（乳腺肿瘤细胞）hepg2（肝肿瘤细胞）PC3（前列腺肿瘤细胞）；二甲基亚砜（DMSO）、胰蛋白酶、PBS,购自于索莱宝；完全RPMI1640培养基、新生牛血清(NBS)，购自于南京凯基生物技术有限公司；TUNEL细胞原位凋亡

7、测定试剂盒、活性氧试剂盒及细胞周期检测试剂盒（购自于南京凯基生物技术有限公司）、ELISA试剂盒、Westernblot检测试剂盒。其它试剂均为分析纯。1.2仪器二氧化碳孵箱（Thermo）；单人双面超净工作台（SW-CJ）；倒置式生物显微镜（XDS-1B）；酶标仪（Infinitef200）；流式细胞仪（FACSCalibur）；高速离心机（TGL-16G）；数控超声波清洗器（KQ-600DB）；旋转蒸发仪（RE-52A上海亚荣生化仪器厂）、恒温干燥箱（施都宝Bao-80A）、恒温水浴锅(HW.SY21-

8、K)、超低温冰箱（thermo）。10第2章实验方法2.1细胞培养A549细胞的培养A549细胞为人肺腺癌细胞，属于传代细胞系，可稳定地传代培养。一般用胰酶消化后，加入生长液稀释，以1：2～1：3传代培养都是可行的。一、[所需溶液]1，细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)——无Ca、Mg名称用量NACL8.00gKCL0.20KH2PO40.20Na2HPO4.。12H2O1.15加水至1000mL,将PH调至7.