华农酶工程习题down

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1、第一章1.简述酶与一般催化剂的共性以及作为生物催化剂的特点共同点：只能催化热力学所允许的的化学反应，缩短达到化学平衡的时间，而不改变平衡点：反应前后酶本身没有质和量的改变：很少量就能发挥较大的催化作用：其作用机理都在于降低了反应的活化能。酶作为生物催化剂的特点：1.极高的催化率；2.高度专一性；3.酶活的可调节性；酶的不稳定性。5.酶失活的因素和机理。酶失活的因素主要包括物理因素，化学因素和生物因素物理因素1热失活：热失活是由于热伸展作用使酶的反应基团和疏水区域暴露，促使蛋白质聚合。2冷冻和脱水：

2、很多变构酶在温度降低是会产生构象变化。在冷冻过程中，溶质（酶和盐）随着水分子的结晶而被浓缩，引起酶微环境中的pH和离子强度的剧烈改变，很容易引起蛋白质的酸变性。3.辐射作用：电离辐射和非电离辐射都会导致多肽链的断裂和酶活性丧失。4.机械力作用：化学因素1.极端pH：极端pH远离蛋白质的等电点，酶蛋白相同电荷间的静电斥力会导致蛋白肽链伸展，埋藏在酶蛋白内部非电离残基发生电离，启动改变。交联或破坏氨基酸的化学反应，结果引起不可逆失活。极端pH也容易导致蛋白质水解。2.氧化作用：酶分子中所含的带芳香族侧

3、链的氨基酸以及Met,Cys等，与活性氧有极高的反应性，极易受到氧化攻击。3.聚合作用：加热或高浓度电介质课破坏蛋白质胶体溶液的稳定性，促使蛋白质结构发生改变，分子间聚合并沉淀。4.表面活性剂和变性剂：表面活性剂主要改变酶分子正常的折叠，暴露酶分子疏水内核的疏水基团，使之变性；变性剂与酶分子结合，改变其稳定性，使之发生变性。生物因素微生物或蛋白水解酶的作用使酶分子被水解。6.简述酶活力测定方法的原理直接测定法：有些酶促反应进行一段时间后，酶底物或产物的变量可直接检测。间接测定法：有些酶促反应的底物

4、或产物不易直接检测，一次必须与特定的化学试剂反应，形成稳定的可检测物。酶偶联测定法：与间接测定法相类似，只是使用一指示酶，使第一酶的产物在指示酶的作用下转变成可测定的新产物。第二章1.在酶制剂工业生产中为什么以微生物发酵生产为主？应用微生物来开发酶有下列优点：1.微生物生长繁殖快，生活周期短。2.微生物种类繁多。3.当基因工程介入时，动植物细胞中存在的酶，几乎都能够利用微生物细胞获得。2.影响酶制剂发酵的因子有哪些？培养基的成分，发酵条件，发酵方法。3，酶制剂发酵生产的方法有哪些？各有何优势？固体

5、培养法：（转桶法，厚层通气法）。优点：1.单位体积培养设备中的产酶量高；2节省动力；3由污染引起的问题少，易于管理；4.酶抽提液的浓度可任意调节；5.后处理设备小。液体深层培养法。优点：设备占地面积小、生产可以机械化，自动化。4.如何提高酶的产量？1.添加产酶促进剂；2.菌种诱变；（生产组成型酶突变株的筛选，抗分解代谢阻遏突变株的选育，抗反馈阻抑突变株的筛选）。第三章2从植物细胞培养产酶的特点分析，为什么与植物体产酶比植物细胞产酶更有优势？1.次生物质的生产是在可控制的条件下进行的，因此可以通过改

6、变培养条件和筛选细胞系来提高次生代谢产物的产率2.培养细胞是在无菌条件下进行的，因此可以排除病菌和虫害的影响，以及环境中的有害物质污染，从而提高产品质量。3.植物细胞的倍增时间一般为12~60h，发酵周期为10~30d，与植物生长周期相比，大大缩短了生产周期。4.可以进行特定的生化转化反应和探索新的合成路线，以获得新的有用物质。3用于产酶的植物细胞的来源有哪些？1直接从外植体中分离得到；2通过诱导愈伤组织而获得；3分离原生质体后再经过细胞壁再生而获取所需的植物细胞。4动物细胞培养前都需要做哪些准备

7、工作？1基质的准备2培养环境的准备【营养物质，细胞的生产环境（温度，气相，pH，渗透压）】3细胞的准备（原代细胞培养，传代细胞培养）5根据细胞在培养基中的位置不同，动物细胞的培养方式有哪些？1贴壁培养，2悬浮培养，3微载体培养系统，4包埋培养，5微囊化培养。第四章现代分子技术产酶1什么是克隆酶？试述克隆酶生产的基本过程。克隆酶：利用DNA重组技术而大量生产的酶，称克隆酶。克隆酶生产的基本过程：1目的基因的获得；2载体的选择；3目的基因与载体分子的连接（黏性末端，平末端的连接）；4重组DNA的转化；

8、5克隆酶基因的表达（原核生物，真核生物的表达系统）2什么是基因的定点诱变技术？目前已建立的定点诱变方法主要有哪些？定点诱变技术：通过取代、插入或缺失克隆基因或DNA序列中的任何一个特定的碱基，从而实现心中体外特异性改变某个基因，这种技术称为定点突变技术。已建立的定点诱变方法主要有盒式诱变、寡核苷酸引物诱变、PCR诱变3什么是抗体酶？抗体酶的制备的方法主要有哪些？抗体酶：抗体酶是一类免疫系统产生的、具有催化活性的抗体。抗体酶的制备方法：拷贝法；引入法；诱导法；抗体库法。4简述进化酶、