一种快速提取棉花干种子基因组dna的新方法

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1、棉花学报CottonScience2014袁26渊1冤院87~94一种快速提取棉花干种子基因组DNA的新方法*郎需勇袁刘伟霞袁杨亮袁周文华袁吴建功袁别传述渊湖北惠民农业科技有限公司袁湖北武汉430070冤摘要院利用SSR(Simplesequencerepeats)分子标记技术袁能够快速有效地进行杂交棉纯度鉴定遥为了攻克SSR分子标记技术中存在的技术难关袁本文专门对棉花干种子胚的基因组DNA提取方法进行了研究遥利用该方法袁只需要2次加液尧1次离心袁从基因组DNA提取到SSR-PCR扩增袁最后电泳袁进行谱带分析袁整个过程仅需4.5～5h遥本方法成本低尧速度快尧操作简单袁适用于批量化DNA的提取

2、袁且整个提取过程无毒尧无污染袁是一种资源节约型和环境友好型的高效提取方法袁适用于大批量样本的SSR分子标记鉴定工作遥关键词院棉花曰胚曰SSR曰基因组DNA中图分类号院S562.035.3文献标志码院A文章编号院1002-7807(2014)01-0087-08*LangXuyong,LiuWeixia,YangLiang,ZhouWenhua,WuJiangong,BieChuanshu(430070)SSR(simplesequencerepeats)molecularmarkertechnologycanquicklyandefficientlyidentifythepurityofhy

3、bridcottonseeds.ThisstudywasaimedatovercomingtechnicaldifficultiesofthistechnologyandfindingagenomicDNAextrac-tiontechniquefromdrycottonseedembryo.Thismethodrequiresonlytwofluidadditionsandonecentrifugation.Fromgenom-icDNAextractiontoSSR-PCRamplification,electrophoresis,andfinallyband-spectrumreadi

4、ng,theentireprocessrequireson-ly4.5–5h.Themethodhaslowcost,highspeed,simpleoperation,andissuitableformassDNAextraction.Theentireextrac-tionprocessisnon-toxicandnon-polluting,soitisaresource-savingandenvironmentallyfriendlysolutionthatcouldbeusedforlargesamplequantitySSRmolecularmarkerwork.cotton;em

5、bryo;SSR;genomicDNA随着市场上棉花品种的不断增加袁而其遗传高效尧快速提取是基本环节遥目前已有多种DNA[6]基础又相对狭窄袁使棉花各品种间在形态学鉴定提取方法袁如CTAB(Cetrimoniumbromide)尧SDS[7]上也越来越困难袁导致棉花品种杂尧乱现象日益(Sodiumdodecylsulfate)等方法可提取高质量尧[1]严重袁从而对棉花产量和质量造成了严重影响遥高产量DNA遥这些方法应用于SSR作物辅助育近年来袁随着分子生物学和生物技术的发展袁证种或者杂交种纯度鉴定对大量样本进行分析明SSR(Simplesequencerepeats)分子标记技术应时袁要求基

6、因组DNA提取人员操作熟练袁整个用于杂交棉纯度鉴定袁能够快速尧有效地对棉花过程步骤繁琐尧耗时较长尧试剂繁多且成本较[2-3]品种的质量进行控制遥SSR分子标记检测技术高袁另外对仪器设备有特殊要求等袁这些缺点限可以在短时间内检测出棉花种子的纯度袁具有速制了其应用遥本研究以棉花干种子胚为材料袁探度快尧准确性高等优点袁能够切实有效地防止制索一种适用于棉花干种子基因组DNA的快速[1-5]种农户的掺杂使假遥提取新方法遥应用SSR分子检测过程中袁对基因组DNA收稿日期院2013-06-07作者简介院郎需勇渊1985-冤袁男袁硕士袁langxy0710@163.com曰*通讯作者袁bcs766@yaho

7、o.com.cn基金项目院转基因生物新品种培育重大专项渊2012ZX08013-012冤88棉花学报26卷材料与方法DNA提取缓冲液袁用PCR板硅胶盖封好袁再将混实验材料合体系置于PCR扩增仪上94℃15～20min曰-1选用由湖北惠民农业科技有限公司提供的3冤室温3000r窑min离心2min袁用12孔道鄂杂棉10号渊太D5F1冤尧伊陆早3号尧鄂杂棉10移液器将上清液吸出去掉袁重复步骤2冤一遍曰号父本尧鄂杂