茶树csspms基因全长cdna克隆和时空表达分析

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1、园艺学报2014，（4111）：2291–2298http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com茶树CsSPMS基因全长cDNA克隆和时空表达分析*胡靖妍，朱旭君，王伟东，王明乐，尹盈，黎星辉（南京农业大学园艺学院，南京210095）摘要：为探究精胺合成酶（sperminesynthase，SPMS）与茶树（Camelliasinensis）耐寒性的关系，以茶树品种‘迎霜’为试验材料，利用简并引物PCR扩增技术结合5′/3′RACE方法，获得与低温胁迫相关的CsSPMS片段cDNA全长序列（GenBa

2、nk登录号为KJ580429）。该序列全长1374bp，包含1113bp的完整开放阅读框（ORF），编码371个氨基酸，预测分子量41.28kD；构建亚细胞定位载体pJIT166-GFP/SPMS，亚细胞定位结果显示CsSPMS定位在细胞核上。荧光定量PCR分析表明CsSPMS在根、茎、叶、芽、花和果中都有表达，在根、茎中表达量较高；低温胁迫处理下不同组织CsSPMS的表达量，在叶片中2h达到峰值，而在根中12h达到高峰；在低温条件下4个茶树品种的耐寒性与CsSPMS表达量密切相关。关键词：茶树；CsSPMS；亚细胞定位；基因克隆；基因表达中图分类号：S571.1文献标志码：A文章编号：051

3、3-353X（2014）11-2291-08CloningandExpressionAnalysisofCsSPMSinTeaPlant*HUJing-yan，ZHUXu-jun，WANGWei-dong，WANGMing-le，YINYing，andLIXing-hui（CollegeofHorticulture，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China）Abstract：Inordertoexploretherelationshipbetweensperminesynthase（SPMS）andcoldresistanceoftea

4、plant（Camelliasinensis），thefull-lengthcDNAsequenceofSPMSgenewasclonedusingreversetranscription-PCR（RT-PCR）combinedwithRACEtechniquesfromteaplantcultivar‘Yingshuang’.ThisgenewasnamedCsSPMSwithGenBankaccessionnumberKJ580429.Itwas1374bpinlength，containinga1113bpopenreadingframe（ORF）whichencoded371amino

5、acidresiduesof41.28kDmolecularweight.ThelocalizationassaysindicatedthatCsSPMSproteinlocalizedinthecellnucleus，afterobservingitssubcellularlocalizationbythefusionexpressionvectorpJIT166-GFP/SPMS.CsSPMSgeneexpressedinallthetissues，includingroot，stem，leaf，flowerandfruitanalyzedbyquantitativereal-timePC

6、R（qRT-PCR），thehighestexpressionlevelwereinrootandstem.TheqRT-PCRanalysisalsoindicatedthattheexpressionlevelofCsSPMSwasup-regulatedinroots，stemsandleavesbycoldtreatment.ThetopexpressionlevelofCsSPMSinleaveswasafter2htreatment，whileafter12htreatment收稿日期：2014–07–18；修回日期：2014–10–08基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项（

7、CARS-23）；江苏省自然科学基金—青年基金项目（BK20140714）；高等学校博士学科点专项科研基金项目（20130097120013）；国家自然科学基金项目（31400584）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：lxh@njau.edu.cn；Tel：025-84395182）2292园艺学报41卷inroots.Furthermore，coldresi