不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响

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1、不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响：王国平，王燕蓉，梁雪云，崔岫，孙静【摘要】　　目的观察不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响。方法分别采用程序冷冻法(PFG)、快速冷冻法(RFG)、玻璃化冷冻法(VG)冻存胎儿卵巢组织，解冻后进行光镜、电镜观察。结果光、电镜组织形态学观察发现冻后各组卵泡结构均存在一定程度的冷冻损伤。冷冻后的胎儿卵巢内形态正常的卵泡数明显下降，在2mm×2mm×1mm的卵巢皮质内，形态正常的卵泡数在PFG、RFG、VG及新鲜对照组(FCG)中分别为(992.3±618.2)

2、个、(542.8±202.5)个、(1604.8±964.0)个和(1888.2±645.3)个。RFG卵泡数显著低于FCG与VG(P＜0.05)，但与PFG间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论三种冷冻方法均可有效冻存胎儿卵巢组织，其中玻璃化法对卵巢内早期卵泡的损伤最小，单位体积内保存的卵泡数最多。【关键词】程序冷冻法；快速冷冻法；玻璃化冷冻法；早期卵泡；损伤　　Abstract：ObjectiveTodistinguishtheeffectsofthreedifferentfreezingmet

3、hodsonmorphologyoffetalovarytissue.MethodsThefetalovarytissuefreezing，rapidfreezing，andvitrification.Afterbeingthaicroscopy.ResultsThepost-thaeextend，injuredorphologicallybymeansoflightandelectronmicroscopy.Thenumberofmorphologicallynormalfollicleseof2m

4、m×2mm×1mmdissections，thenumberofmorphologicallynormalfolliclesis992.3±618.2、542.8±202.5、1604.8±964.0and1888.2±645.3ineachfreezinggroupandthefreshtransplantinggroup.ThenumberoffolliclesinRFGethodscanalleffectivelypreservefetalovarytissue.Amongthethreefre

5、ezingmethods，vitrificationhastheleastfrozeninjuryofearlyfollicles，anditpreservethemostfolliclesperunitvolume.　　Keyfreezing；rapidfreezing；vitrificationearly；follicles；injury　　卵巢中数以百万计的原始卵泡是卵巢功能的一个巨大储备，卵巢冻存是保存卵巢功能的一个理想的途径。人胎儿卵巢易于获得，卵巢皮质中具有大量均衡的原始卵泡，是进行卵巢组

6、织深低温冻存及效果判断的理想材料。目前卵巢组织冻存方法主要有程序冻存法、快速冻存法、玻璃化冻存法［1］。本文进行了上述三种冻存方法对胎儿卵巢组织形态和卵泡数量影响的研究，希望为卵巢组织保存提供有效的冻存方法。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1胎儿卵巢的获取　　胎儿卵巢取自因各种原因药物引产的20～28周死亡女胎，征得家属同意，引产后2h内无菌取材，切除卵巢周围多余的脂肪组织、系膜及髓质，将皮质切成2mm×2mm×1mm大小的皮质块待用。冷冻管为0.5mL的国产塑料麦管，直径0.5cm，长8c

7、m。　　1.1.2卵巢冻存实验分组　　新鲜对照组(freshcontrolgroup，FCG)；②程序法冷冻组(programfreezinggroup，PFG)；③快速法冷冻组(rapidfreezinggroup，RFG)；④玻璃化法冷冻组(vitrificationgroup，VG)。　　1.1.3实验用液体①冷冻保护液A组液体(用于程序冷冻法和快速冷冻法)：A1液：1.5M乙二醇(EG)＋100μMβ-ME；A2液：1.5M乙二醇(EG)＋100μMβ-ME＋0.1M蔗糖。B组液体(用于玻璃化

8、冷冻法)B1液：1.5MEG；B2液：5.5MEG+30%聚蔗糖+0.5M蔗糖。②解冻液A组液体(用于程序冷冻法和快速冷冻法)：0.5M蔗糖+100μMβ-ME；B组液体(用于玻璃化冷冻法)：0.5、0.25、0.125M的蔗糖液　　1.2方法　　1.2.1冷冻方法1)程序冷冻法冷冻程式参照Oktay等提出的慢冻-速融方法［2］，渗透平衡结束后，放入程序降温仪内，按如下过程开始程序降温，即从4℃以1℃/min的速率降至-7℃→平衡10min后，手工植冰(