运用hplc测量麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量

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1、运用HPLC测量麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量　　驱寒抗感颗粒为纯中药制剂，原处方是北京市密云县中医医院临床验方，后经化裁而成。全方由麻黄、荆芥、苦杏仁、桂枝、甘草等药材组成，具有散寒解表、祛风止咳的功效，主治外感风寒表证。该制剂临床使用后效果良好，且比原汤剂服用量小，服用方便，患者易于接受。为了有效地控制制剂质量，保证药效，经过处方分析，我们采用薄层色谱(TLC)法对该制剂中的主要药物麻黄、桂枝、苦杏仁进行了定性鉴别，应用高效液相色谱(HPLC)法对麻黄中的主要有效成分盐酸麻黄碱进行了含量测定，以便建立一种科学准确且操作简便的质量控制标准。　　1材料　　1．1仪器120

2、0型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司;AD－2百万分之一电子天平，美国PerkinElmer公司;H66005超声波清洗器，无锡市超声电子设备厂。　　1．2药品与试剂盐酸麻黄碱、桂皮醛、苦杏仁苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号分别为:171241－201007、110710－201016、185361－201006;驱寒抗感颗粒，北京市密云县中医医院制剂室自制，批号:20120705，20120707，20120709;水为重蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2．1定性鉴别　　2．1．1麻黄的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加适量浓氨

3、水湿润，再加三氯甲烷50mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加入1mL甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含麻黄的阴性样品，同法制成缺麻黄阴性对照溶液;另取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成含量1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照TCL法试验，分别吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液(20∶5∶0．5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点;阴性对照无干扰。麻黄的TLC见封3，图1。　　2．

4、1．2苦杏仁的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加甲醇50mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加入2mL甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同法制成缺苦杏仁阴性对照溶液;另取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成含量2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。　　照TCL法试验，分别吸取上述溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12h的下层溶液作为展开剂，展开，取出，立即用0．8%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加热至斑点显色清晰。

5、结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;阴性对照无干扰。苦杏仁的TLC见封3，图2。　　2．1．3桂枝的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加乙醇25mL，超声(功率120in，滤过，滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含桂枝的阴性样品，同法制成缺桂枝阴性对照溶液;另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成含量1μL/mL的溶液，作为对照品溶液。照TCL法试验，分别吸取上述供试品和阴性对照溶液各10μL，对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，

6、喷以二硝基苯肼乙醇试液。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点;阴性对照无干扰。桂枝的TLC见封3，图3。　　2．2盐酸麻黄碱的含量测定　　2．2．1色谱条件与系统适用性试验色谱柱:UItimateAQ－C18色谱柱(250mm4．6mm，5μm);流动相:乙腈－0．02mol/L磷酸二氢钾溶液(含0．2%三乙胺，磷酸调pH2．5)(2∶98);检测波长:210nm;柱温:35℃;流速:　　1．0mL/min。在此条件下，盐酸麻黄碱能够与其他成分很好的分离，供试品中的盐酸麻黄碱保存时间与对照品相同，并且阴性对照无干扰。见图4。　　2．2

7、．2对照品溶液的制备精确称取适量盐酸麻黄碱对照品，加入0．1%盐酸甲醇溶液制成含量42．30μg/mL的溶液，即得。2．2．3供试品溶液的制备取驱风抗感颗粒1g，研细(过5号筛)，精确称取0．5g，置于50mL具塞量瓶中，加入1．0mL浓氨试液，密闭，使之充分湿润，加入氯仿40mL，超声(功率120in，放置至室温，氯仿定容，过滤，弃去初滤液。精确量取25mL续滤液，加入0．1%盐酸甲醇溶液2mL，摇匀，挥干，残渣加入0．1%盐酸甲醇溶液使溶解，移至5mL量瓶中，加入0．1%盐酸甲醇溶液定容，离心，分取上清液，即得供试品溶液。　　2