代谢型谷氨酸受体在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用

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1、代谢型谷氨酸受体在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用：柯昌斌黄晓霞1罗向红李清刘菊英【摘要】目的评价代谢型谷氨酸受体(mGluR5)在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用。方法3月龄组)，另取32只正常大鼠作为对照组(C组，n=32)。M组腹腔注射mGluR5拮抗剂20mg/kg，1次/d，C、D组注射等体积生理盐水。各组分别于第2、4、6、8周(T1～4)末随机取8只大鼠，采用vonFrey纤维丝测定双后足机械缩足反应阈值(M组T1～4时Methods96PEP(selectivemGluR5inhib

2、itor)+DNP.Diabetesmellitus(DM)g/kg.Bloodglucoseleveleasuredeveryedbybloodglucoselevel≥16.0mmol/Linthe4thentstimulation(M组)，另取32只正常大鼠作为对照组(C组，n=32)。模型制备成功后每周一上午M组腹腔注射mGluR5拮抗剂2甲基6苯基乙炔嘧啶(MPEP)20mg/kg，1次/d，C、D组注射等体积生理盐水，直至处死大鼠。　　1.3M510型激光共聚焦显微镜进行观察阳性

3、反应。　　1.5mGluR5mRNA检测RTPCR检测mGluR5mRNA水平每100mg组织加入Trizol1ml用玻璃匀浆器匀浆,室温放置10min,加入200μl氯仿，12000r/min离心10min;取上清加入500μl异丙醇，12000r/min离心10min后弃上清;加入75%乙醇1ml洗涤沉淀，5000r/min离心5min后弃上清;冰上干燥RNA沉淀8min后用DEPC水溶解。用紫外分光光度仪测定RNA的浓度;用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳,通过成像系统检测提取RNA的完整性。用P

4、rimerpremier5.0软件设计引物，mGluR5上游引物:5′GTCAGTCTCCTGATGTCAAGTGG3′,下游引物：5′TTTTCACAGAGGCCTGCATAGCCTG3′;βactin上游引物：5′GTCACCAACTGGGACGATATG3′,下游引物：5′GCCTGGATGGCTACGTACATG3′。PCR反应条件：94℃10min预变性，94℃30s、55℃30s、72℃30s,循环35次，72℃延伸7min。mGluR5和βactin同时扩增,条件相

5、同。取上述mGluR5和βActinPCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像系统和凝胶分析系统进行PCR产物扫描和半定量分析,采用目标条带积分光密度值与内参βactin条带积分光密度值的比值表示mGluR5mRNA的表达相对水平。　　1.6统计学分析采用SPSS13.0统计学软件进行分析，计量资料以x±s表示，组间及组内比较采用单因素方差分析。　　2.3RTPCR结果与C组比较，D组T1～4时M组T1～4时MPEP是mGluR5的特异性拮抗剂，可以竟争性结合阻断了兴奋性氨基酸与mGluR5

6、的结合，受体激活减少而发挥生物学效应。在神经系统的物理损伤、缺血再灌注损伤以及应激损伤中表现出明显的神经保护作用;在甲醛试验、角叉菜胶疼痛模型和脊神经结扎和脊髓损伤以及炎性疼痛等模型中有治疗慢性伤害性疼痛的作用。在实验中观察到，MPEP处理明显缓解了疼痛的症状，且随着时间的延长，大鼠MPEP对糖尿病神经病理性疼痛有明显的治疗作用。由于MPEP是通过的特异性拮抗mGluR5而发挥生物学效应，MPEP的应用可明显抑制糖尿病神经病理性疼痛，因此，糖尿病引起脊髓后角mGluR5的高表达及高度的激活在糖尿病神

7、经病理性疼痛的产生和维持中有重要作用。这为糖尿病神经病理性疼痛的治疗提供了新思路，可以从mGluR5的转录水平到受体的活化过程对糖尿病时各种伤害性信息向初级中枢的传递过程进行调控，以寻找最佳的治疗方法。　　综上所述，糖尿病引起大鼠脊髓后角mGluR5的高表达和过度活化，导致各种伤害性信息向初级中枢的传递过程的易化和放大，同时兴奋性谷氨酸释放增加导致神经系统的毒性损伤共同作用的是糖尿病神经病理性疼痛发生和发展的重要环节。【参考文献】　1ZieglerD.Treatmentofdiabeticneuro

8、pathyandneuropathicpain〔J〕.DiabetesCare，2008;31(2):25561.　　2ChenSR,PanHL.DistinctrolesofgroupⅢmetabotropicglutamatereceptorsincontrolofnociceptionanddorsalhornneuronsinnormalandnerveinjuredrats〔J〕.JPharmacolExpTher,2005;312(1):1206.