细胞实验方案2015.docx

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1、实验方案一客户提供材料1.PTRF过表达质粒2.PTRF抗体（二）细胞水平实验1.细胞筛选（1）胃癌细胞并设置正常细胞对照（2）食管癌细胞并设置正常细胞对照（3）骨肉瘤并设置正常细胞对照（4）肺癌并设置正常细胞对照胃癌，食管癌，骨肉瘤，肺癌各选取两种癌细胞及正常一株对照细胞共12株细胞。通过Western-blot、qRT-PCR检测PTRF的表达量。Western-Blot检测：需要两张膜。850元/膜×2膜=1700元qRT-PCR检测：180元/样本/指标×12样本×3重复=6480元（3重复）细胞培养：600

2、0元细胞购买费用待定通过上述检测，胃癌、食管癌、肺癌、骨肉瘤各一株细胞用于下述实验检测细胞参考：中文名细胞英文名价格（元）备注人胃癌细胞HGC-27800MGC80-31200自有细胞MKN-281200自有细胞MKN-451600国产细胞NCI-N871500人食管癌细胞EC181500EC-97061500ECA-1091200kyse-1401600fromJapanKyse4501600fromJapanKYSE-5101600fromJapanTE-11000骨肉瘤细胞U-2OS1200MNNG/HOSCl

3、1000Saos-21000SW13531000人肺癌细胞95-C1200A5491200Calu-11200H2921200H4601200HCC8271000LECPα-11200MSTO-211H1000NCI-H12991000NCI-H16501000NCI-H2921000NCI-H3581000NCI-H4461200NCI-H460800NCI-H6611000人正常胃黏膜细胞系GES-11600人正常食管上皮细胞HEEC1500人正常肺上皮细BEAS-2B5600ATCC®CRL-9609™人正常肺

4、细胞MRC-51200人正常肺上皮细胞GNHu27待定人胚肺正常细胞株NRC-51200人肺细胞细胞HLF-a待定2.实验分组空白对照组、空载体组、PTRF过表达组胃癌，食管癌，肺癌，骨肉瘤四种细胞做转染转染费用：3500元3.检测（1）通过Western-blot检测PTRF的表达量，同时检测MMP2、MMP9的表达WB:4种细胞×3组×3指标=36样四张膜，850元/膜×4膜=3400元MMP2、MMP9抗体共享费用：1800元（2）Transwell侵袭实验220元/孔×4种细胞×3组×3重复=7920元（3）

5、细胞划痕实验160元×4种细胞×3组×3重复=5760元（4）裸鼠成瘤24只裸鼠，每组8只。培养胃癌、食管癌、骨肉瘤及肺癌细胞株，待细胞数量达到106左右时，裸鼠皮下成瘤。肿瘤细胞密度调整为2×107个/ml。用1ml注射器于每只裸鼠背部皮下注射肿瘤细胞悬液0.2ml，每2天观察裸鼠及移植瘤生长情况，观察移植瘤的生长变化情况，测量肿瘤的长（L）、短（W）径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。裸鼠购买：110元/只×24只×4种细胞=10560元裸鼠饲养：3元/天/只×24只×4周×7天×4种细胞=8064元模型费用：3

6、5元/只×24只×4细胞=3360元绘制生长曲线：2500元总计（细胞费用暂时按6000元计，还有尚未确定细胞，确定再将费用加上去）1700+6480+6000+3500+3400+1800+7920+5760+10560+8064+3360+2500+6000=67044