生化检测方法汇总

生化检测方法汇总

ID:10016170

大小:383.00 KB

页数:18页

时间:2018-05-21

生化检测方法汇总_第1页
生化检测方法汇总_第2页
生化检测方法汇总_第3页
生化检测方法汇总_第4页
生化检测方法汇总_第5页
资源描述:

《生化检测方法汇总》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、一、血清谷丙转氨酶(SGPT)赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:(1)0.1mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液:①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液:称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中,并稀释至1000ml,4℃保存。②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液:称KH2PO413.61g溶解dH2O中,稀释至1000ml,4℃保存。③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/LpH

2、7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴,4℃保存。(2)标准丙酮酸(含丙酮酸2.0μmol/mL):取标准丙酮酸钠10mg,用上述缓冲液准确定容为50mL。此液须当日用当日配。(3)SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml):取α-酮戊二酸29.2mg,DL-丙氨酸7g,用试剂1溶成100ml,在稀释到刻度前,以1mol/LNaOH调pH7.4(因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降),加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用4天。(4)GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L,α-

3、酮戊二酸2mmol/L):称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内保存。(5)2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg,用1mol/LHCl溶于100ml,置棕色瓶中保存。(6)0.4mol/LNaOH溶液:称取16g固体NaOH,用蒸馏水溶解,冷却至室温,定容至1000mL,备用。操作步骤:1、标准曲线绘制:取试管18支按下表操作。试管

4、号对照12345丙酮酸标准液(1毫升2微克分子)00.050.100.150.200.25SGPT或SGOT底物0.500.450.400.350.300.250.1M磷酸盐缓冲液PH7.40.10.10.10.10.10.1相当于谷丙转氨酶单位0285797150200相当于谷草转氨酶单位02461114190—每个样做3个平行,置37水浴30分钟,各管加2,4-二硝基苯肼液0.5mL,混匀,再在37℃水浴中放置20mL,各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL,混匀,10分钟后,从水浴箱中取出,以蒸馏水调“零”点,用520nm波长比

5、色,读取各管之吸光值,各管之吸光值均减去空白的吸光值,然后以吸光值为纵坐标,各管相应的转氨酶单位为横坐标。绘制成标准曲线。为了方便,可列出各光度相当于转氨酶单位表。2、酶活性测定:取试管两支,注明测定管及对照管。试剂样品测定(每个样3个平行)对照(每个样3个平行)血清(mL)0.10.1SGPT或SGOT底物(mL)0.5—置37℃水浴30分钟(SGOT为37℃,60分钟后再加枸橼酸苯胺1滴)2.4-二硝基苯肼(mL)0.50.5置37℃水浴20分钟SGPT或SGOT底物(mL)—0.5NaOH溶液(mL)5.05.0对照及样品各做3个

6、平行,充分摇匀,静置10分钟后,用520nm波长比色,以蒸馏水调节零点,读取吸光值,用样品减去对照吸光值,求得样品的谷丙转氨酶活力。l谷丙转氨酶活性单位:37℃,pH7.4,每小时每毫升血清催化生成1μmol丙酮酸为1个单位。例:0.1ml血清每小时催化生成0.1μmol丙酮酸,即相当于GPT100U/100ml血清。l注意:1.在测定SGPT时,应事先将底物、血清在37℃水浴中保温,然后在血清管中加入底物,准确记时。2.标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的,超过500U时,需将样品稀释。3.转氨酶只能作用于α-L-氨基酸,对D-

7、氨基酸无作用。实验室多用α-DL-氨基酸(较L-氨基酸价廉),若用L-氨基酸,则用量减半。4.溶血标本不宜使用,因血细胞中转氨酶活力较高,会影响测定效果。5.血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。6.丙酮酸标准液的浓度要求十分精确。由于丙酮酸开封后易变质为多聚丙酮酸,而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不易察觉。建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。7.每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A,若有超出,应仔细检查试剂与仪器方面的问题。8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本可增加测定的吸光度,测定这类标本应做血清标本

8、对照管优点:尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。